丙戊酸鈉增強宮頸癌細胞Hela放射敏感性的實驗性研究.pdf

1、目的：放射治療作為一種傳統(tǒng)治療手段，在腫瘤的綜合治療中具有重要地位，在我國，大約70％的腫瘤需要放射治療的參與。腫瘤對放射線敏感性差或瘤床周圍正常組織對放射耐受性低往往導致放療效果不理想。研制良好的放射增敏劑是提高放療效果的一個重要途徑，也成為腫瘤放射學的前沿課題。近年來，已有不少研究證明組蛋白去乙?；敢种苿?histone deacetylase inhibitors，HDACIs)可通過抑制腫瘤細胞增殖、誘導凋亡、抑制腫瘤血管生成

2、及轉移、降低腫瘤侵襲力等機制發(fā)揮抗腫瘤作用，與放射聯(lián)合還有放射增敏作用。HDACIs放射增敏的機制復雜，至今還未完全闡明。丙戊酸鈉(valproic acid，VPA)一直以來用于癲癇的治療，最近發(fā)現其具有抑制HDAC活性的作用，因其半衰期長、生物利用度高、有效血藥濃度低、毒副作用小等優(yōu)點，而顯示出良好的臨床應用前景。故本實驗選擇其作為HDACIs的代表，進一步闡明其放射增敏的機制，并為臨床用藥提供指導。 方法：不同濃度VPA(

3、0.25mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L、4mmol/L)處理宮頸癌細胞系Hela不同時間(1d、2d、3d、4d、5d)后，通過MTT法檢測VPA對Hela細胞的增殖抑制作用；倒置相差顯微鏡觀察不同濃度VPA作用2d后細胞形態(tài)學變化；0.25mmol/LVPA作用Hela細胞24h后，克隆形成實驗觀察VPA的放射增敏作用；流式細胞儀檢測不同濃度VPA作用后細胞周期分布及細胞凋亡率的變化；半定量RT-PC

4、R測定Caspase-3及Bcl-2基因的表達；Western Blot檢測caspase-3及Bcl-2蛋白的表達，了解VPA誘導細胞凋亡的具體途徑。 結果：HDAC抑制劑VPA對宮頸癌細胞系Hela有增殖抑制作用，且呈濃度、時間依賴性；經VPA處理2d后，Hela細胞逐漸縮小變成長梭形、胞膜皺縮、貼壁不良，有明顯凋亡趨勢；VPA在0.25mmol/L濃度時，對Hela細胞的毒性較低，但有放射增敏作用，克隆形成率明顯減少(P<

5、0.05)；VPA聯(lián)合8GyX線照射組細胞存活曲線與單純照射組曲線相比，“肩”區(qū)減小，VPA抑制Hela細胞對放射致DNA亞致死損傷的修復能力。VPA能夠誘導Hela細胞凋亡，阻滯細胞于G2/M期，同時抑制細胞增殖；VPA無論在轉錄水平，還是翻譯水平都上調caspase-3的表達，并可見蛋白裂解產物，表明VPA可以促進caspase-3的活化，同時下調bc1-2的表達。 結論： HDAC抑制劑VPA對宮頸癌細胞系Hela有增殖抑