Bcl-2ASODN及bax聯(lián)合轉(zhuǎn)染增強(qiáng)人宮頸癌Hela細(xì)胞放射敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究凋亡抑制基因bcl-2反義寡核苷酸(ASODN)和促凋亡基因bax聯(lián)合轉(zhuǎn)染對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡的影響以及對(duì)裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用，進(jìn)而探求其放射增敏作用。 方法:用逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒感染Hela細(xì)胞，獲得Hela-bax細(xì)胞，然后，將bcl-2ASODN轉(zhuǎn)染Hela及Hela-bax細(xì)胞，36h后放射治療，通過MTT法、細(xì)胞形態(tài)學(xué)及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖與凋亡，半定量RT-PCR測(cè)定bcl-2及bax基因的表達(dá)。

2、運(yùn)用Balb/c裸鼠建立宮頸癌移植瘤模型，隨機(jī)分成正常對(duì)照組、bcl-2 SODN治療組、bcl-2ASODN組、bax組和雙基因聯(lián)合治療組，分別處理后定期測(cè)量腫瘤體積，并計(jì)算抑瘤率，并在治療結(jié)束后應(yīng)用缺口末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL法)檢測(cè)移植瘤細(xì)胞的凋亡。 結(jié)果:Hela細(xì)胞經(jīng)bcl-2ASODN及bax聯(lián)合轉(zhuǎn)染并放療后，光鏡觀察有明顯凋亡趨勢(shì)，MTT法及流式細(xì)胞儀檢測(cè)其凋亡率明顯高于單基因轉(zhuǎn)染+放療組(P<0.

3、05)，RT-PCR結(jié)果顯示bax基因表達(dá)顯著增強(qiáng)，而bcl-2基因表達(dá)較各對(duì)照組則明顯減弱。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)25只裸鼠2周后均達(dá)成瘤標(biāo)準(zhǔn)，并在治療第17天后，bcl-2ASODN組及bax組的抑瘤率與對(duì)照組、SODN組比較開始有顯著性差異(P<0.01)；治療第21天時(shí)，采用<'60>Co γ射線6Gy對(duì)移植瘤單次照射；治療結(jié)束時(shí)雙基因組抑瘤率為40.0﹪，與其他組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；TUNEL法檢測(cè)移植瘤細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示，高