N-甲基-D-天冬氨酸受體在癲癇軸突損害中的作用及其分子機制研究.pdf

1、第一部分、癲癇患者及PTZ點燃癲癇大鼠模型腦組織中的軸突損害
　　目的：探討癲癇患者腦組織和戊四氮(PTZ)點燃癲癇大鼠模型腦組織中軸突損害的情況。
　　方法：收集難治性癲癇患者手術腦組織標本，建立PTZ點燃癲癇大鼠模型并分離收集其腦白質，用Western blot檢測難治性癲癇患者腦組織和PTZ腹腔注射1天、1周、2周、3周和4周的大鼠腦白質中高分子量神經(jīng)細絲(NF-H)、淀粉樣前體蛋白(APP)、總Tau蛋白、磷酸化Ta

2、u蛋白S396(p-Tau S396)和磷酸化Tau蛋白T231(p-Tau T231)，并計算Tau蛋白磷酸化水平。
　　結果：相比對照組，難治性癲癇患者腦組織中NF-H水平明顯降低，APP水平升高，總Tau蛋白減少，Tau蛋白磷酸化水平也升高。PTZ點燃癲癇大鼠腦白質中也存在NF-H減少、APP水平升高、總Tau蛋白減少和Tau蛋白磷酸化水平升高，并且其程度隨PTZ注射時間延長而逐漸加重。
　　結論：難治性癲癇患者和PT

3、Z點燃癲癇大鼠腦組織中均存在以NF-H減少、APP積聚和總Tau蛋白減少為表現(xiàn)的軸突損害，并同時伴有Tau蛋白磷酸化水平升高。
　　第二部分、NMDA受體、GSK-3β和Cdk5在癲癇軸突損害中的作用
　　目的：探索NMDA受體、GSK-3β和Cdk5是否參與了癲癇中軸突損害的形成。
　　方法：對大鼠每日腹腔注射PTZ共21天并成功建立點燃癲癇模型后，給予每日腹腔注射非選擇性NMDA受體拮抗劑美金剛、NR2B亞單位選擇

4、性NMDA受體拮抗劑艾芬地爾、GSK-3β拮抗劑氯化鋰、Cdk5拮抗劑Roscovitine或生理鹽水共7天，并用免疫組織化學術檢測大鼠胼胝體中NF-H和APP水平，用western blot檢測大鼠腦白質中NF-H、APP、Tau、p-Tau S396、和p-Tau T231的水平，并計算Tau蛋白磷酸化水平。
　　結果：使用美金剛和艾芬地爾阻滯NDMA受體可以減輕PTZ點燃大鼠腦白質中NF-H減少和APP積聚的程度，并減輕PT

5、Z點燃導致的總Tau蛋白減少和Tau蛋白磷酸化水平升高。用氯化鋰和Roscovitine分別抑制GSK-3β和Cdk5也可以減輕PTZ點燃導致的腦白質中NF-H減少和APP積聚，并減輕PTZ點燃導致的Tau蛋白磷酸化水平升高。此外，氯化鋰可逆轉PTZ點燃導致的總Tau蛋白減少，而Roscovitine則并不影響總Tau蛋白的水平。
　　結論：抑制NMDA受體、GSK-3β和Cdk5均可以改善PTZ點燃癲癇大鼠模型中的軸突損害。提示

6、NMDA受體、GSK-3β和Cdk5興奮參與了癲癇軸突損害的形成。
　　第三部分、NMDA受體參與癲癇軸突損害的分子機制
　　目的：研究NMDA受體是否可能通過興奮GSK-3β和Cdk5進而介導癲癇的軸突損害。
　　方法：對大鼠每日腹腔注射PTZ21天并成功建立點燃癲癇模型后，再行每日腹腔注射非選擇性NMDA受體拮抗劑美金剛、NR2B亞單位選擇性NMDA受體拮抗劑艾芬地爾、GSK-3β拮抗劑氯化鋰、Cdk5拮抗劑Ros

7、covitine或生理鹽水共7天，用western blot檢測大鼠腦白質中總GSK-3β、磷酸化GSK-3βY216(p-GSK-3βY216)、磷酸化GSK-3βS9(p-GSK-3βS9)和Cdk5的蛋白水平，用多聚酶鏈式反應(PCR)檢測大鼠腦白質中GSK-3βmRNA和Cdk5 mRNA的水平。
　　結果：在PTZ點燃大鼠中使用美金剛和艾芬地爾阻滯NDMA受體可以降低Cdk5的mRNA表達和蛋白水平，并且可以升高p-GS