Gli通過PI3K-AKT途徑促進食管鱗癌KYSE-30細胞上皮-間質轉化的研究.pdf

1、目的：食管癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率分別占我國惡性腫瘤的第5位和第4位，我國食管癌的病理類型以食管鱗狀細胞癌為主。由于早期食管癌的癥狀不明顯，一旦確診后多為中晚期，即使采取以手術、放化療為主的綜合治療，其遠期治療效果并沒有明顯改善，近年來針對腫瘤發(fā)病的分子學機制采取特異性的靶向治療成為抗腫瘤研究的熱點，Hedgehog（Hh）信號通路在胚胎期調控多種細胞的分化和生長，對維持成熟器官內環(huán)境穩(wěn)定及人類多種惡性腫瘤的發(fā)

2、展及轉移密切相關。Gli作為Hh信號通路下游調控中心，其異常激活可以啟動下游多種腫瘤相關基因的轉錄。最近研究表明，Gli基因在人類基底細胞癌、乳腺癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中被異常激活并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉移密切相關。PI3K通過磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidvlinositol-3-kinases,PI3K）是細胞內重要信號通路之一，主要通過活化下游的靶蛋白AKT參與細胞的增殖、凋亡、侵襲轉移過程。上皮-間質轉化（epi

3、thelial-mesenchymal transition，EMT）是指上皮型細胞在特定的生理或病理情況下向間質型細胞表型轉變的過程，是腫瘤浸潤和轉移的重要機制之一。有研究發(fā)現(xiàn)Hh通路可以通過影響PI3K通路進而影響EMT過程促進腫瘤的侵襲轉移，但目前國內外關于食管鱗癌中Gli是否通過PI3K/AKT通路調控EMT過程尚無明確結果，因此本研究主要探討Gli調節(jié)食管鱗癌KYSE-30細胞上皮-間質轉化（epithelial-mesenc

4、hymal transition,EMT）的分子學機制，尋找有效治療食管鱗癌的分子靶向藥物。
　　方法：實時熒光定量PCR法觀察GANT61處理KYSE-30細胞24h后對Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin mRNA表達的影響；Western blot試驗觀察GANT61處理KYSE-30細胞24h后對Gli1、Gli2、p-AKT、AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表達的影響；Transw

5、ell侵襲實驗觀察GANT61抑制Gli1和Gli2表達后對食管鱗癌細胞遷移侵襲能力的影響；應用N-Shh活化KYSE-30細胞24小時后，對相應Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherinmRNA及相應蛋白及AKT、p-AKT蛋白進行測定，并通過Transwell侵襲實驗研究對其侵襲能力的影響，同時還應用 GANT61&N-Shh作用KYSE-30細胞24小時，實時熒光定量PCR法觀察KYSE-30細胞中Gli1、Gli

6、2、Vimentin和N-cadherin mRNA表達量的變化；Western blot試驗觀察KYSE-30細胞中Gli1、Gli2、p-AKT、AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表達的變化；Transwell侵襲實驗觀察GANT61&N-Shh組對食管鱗癌細胞侵襲轉移能力的影響。
　　結果：
　　1.Gli抑制劑GANT61組與DMSO對照組相比可以顯著下調食管鱗癌KYSE-30細胞的Gli1、Gli2

7、、Vimentin和N-cadherin mRNA表達(P均<0.01)；Western blot顯示GANT61可以下調KYSE-30的Gli1、Gli2、p-AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表達(P均<0.01)，而AKT蛋白表達沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）；Transwell侵襲實驗顯示GANT61可以顯著抑制KYSE-30細胞的侵襲能力(P<0.01)。
　　2.應用Gli激動劑N-Shh組可以顯著上調

8、食管鱗癌KYSE-30細胞的Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin mRNA，mRNA表達(P均<0.01)，Western blot顯示N-Shh可以上調KYSE-30的Gli1、Gli2、p-AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表達(P均<0.01)，而 AKT蛋白表達沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）； Transwell侵襲實驗證實N-Shh可以促進腫瘤細胞的侵襲能力(P<0.01)。
　　3

9、.GANT61&N-Shh組與 GANT61組相比上調了 KYSE-30細胞的Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin mRNA表達(P均<0.01)；Western blot顯示同樣上調了KYSE-30的Gli1、Gli2、p-AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表達(P均<0.01)，而AKT蛋白表達沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。Transwell侵襲實驗顯示GANT61&N-Shh組與GANT61

10、組相比促進了KYSE-30細胞的侵襲能力(P<0.01)。
　　結論：在食管鱗狀細胞癌中Gli的表達與上皮間質轉化過程密切相關， Gli可能通過PI3K/AKT途徑促進上皮間質轉化過程。Gli1和Gli2表達降低可以通過下調p-AKT蛋白的表達從而抑制了上皮間質轉化過程，導致食管鱗狀細胞癌的侵襲轉移能力降低； N-Shh上調Gli1和Gli2之后， p-AKT呈現(xiàn)高表達，從而促進上皮間質轉化過程，增加了細胞的侵襲能力；用GANT6