煙酸受體GPR109A在MIN6細胞上通過抑制Akt-mTOR信號通路產(chǎn)生抗炎作用.pdf

1、目的：
　　煙酸受體GPR109A在很多組織和細胞中都被證明有抗炎活性。發(fā)現(xiàn)小鼠胰島β細胞及MIN6胰島β細胞株表達煙酸受體GPR109A，并且證明在MIN6細胞上，通過激活GPR109A可以抑制IFN-γ和TNF-α誘導(dǎo)的細胞內(nèi)NO累積，由此推測GPR109A在β細胞上同樣也有抗炎活性。在這些研究基礎(chǔ)上，本實驗將利用棕櫚酸對MIN6細胞進行炎癥誘導(dǎo)后，觀察 GPR109A的抗炎作用，并進一步探索它的抗炎機制。并在原代小鼠胰島細胞

2、上初步探討是否存在著相同的抗炎機制。
　　方法：
　　培養(yǎng)MIN6細胞，通過RT-PCR及免疫細胞化學染色驗證MIN6細胞上存在GPR109A的表達。分別予棕櫚酸及棕櫚酸+煙酸干預(yù)，蛋白免疫印跡法（western blotting）檢測INF-γ及GPR109A的表達情況和Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化水平。為進一步驗證GPR109A與Akt/mTOR信號通路的關(guān)系，分別予不同濃度的煙酸和3-羥基丁酸干預(yù)MIN6細胞

3、，檢測細胞內(nèi)Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化水平。分離小鼠胰島，予煙酸和3-羥基丁酸干預(yù)，熒光定量PCR分析mTOR、p70S6K的表達水平。
　　結(jié)果：
　?、臡IN6細胞表達GPR109A mRNA。⑵MIN6細胞表達GPR109A蛋白。⑶煙酸可部分逆轉(zhuǎn)棕櫚酸誘導(dǎo)的MIN6細胞Akt和p70S6K的磷酸化和IFN-γ的表達。⑷煙酸抑制MIN6細胞內(nèi)Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化。⑸3-羥基丁酸抑制MIN6細