Akt-mTOR活化抗UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、背景：皮膚中KC的凋亡異常與許多皮膚病如銀屑病、扁平苔蘚、濕疹、白癜風(fēng)、皮膚老化和皮膚癌等密切相關(guān)。KC的凋亡易受環(huán)境因素的影響，其中中波紫外線(xiàn)(UVB)輻射尤為重要。UVB輻射易導(dǎo)致皮膚日曬傷，而慢性長(zhǎng)期的輻射則可以導(dǎo)致皮膚光老化甚至皮膚癌的發(fā)生，這一過(guò)程中KC凋亡異常是其重要的病理生理基礎(chǔ)。近年研究發(fā)現(xiàn)UVB體內(nèi)外都可激活KC的抗凋亡信號(hào)分子磷酸肌醇3激酶(PI3K)和Akt。UVB誘導(dǎo)KC凋亡過(guò)程中，胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體(IG

2、F-1R)的活化可以保護(hù)UVB誘導(dǎo)的凋亡，并且IGF-1R缺失可加快UVB誘導(dǎo)的KC凋亡，證實(shí)UVB可以活化IGF-1R、促進(jìn)抗凋亡的作用。上述研究證實(shí)UVB誘導(dǎo)KC凋亡的過(guò)程中存在KC的自身抗凋亡作用，但其具體機(jī)制仍未明確。
　　 目的：通過(guò)建立體外UVB照射HaCaT的模型，檢測(cè)Akt/mTOR通路中p-EGFR、p-Akt、p-S6、p-S6K、p-4EBP1的水平變化，并且檢測(cè)該通路活化對(duì)HaCaT凋亡的影響，旨在探明U

3、VB對(duì)Akt/mTOR通路的影響，以及該通路活化在KC抗凋亡中的作用。闡明UVB誘導(dǎo)KC凋亡和抗凋亡的分子機(jī)制，更加全面準(zhǔn)確理解UVB對(duì)KC作用的機(jī)制，為闡明KC凋亡異常密切相關(guān)的皮膚病如白癜風(fēng)、皮膚老化和皮膚癌的分子作用機(jī)理，并為這些疾病的預(yù)防和治療提供全新的思路和手段。
　　 方法：Western blotting測(cè)定Akt/mTOR通路信號(hào)分子的動(dòng)態(tài)水平變化，免疫熒光Hoechst 33342染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
　

4、　 結(jié)果：
　　 1.UVB可以激活HaCaT細(xì)胞Akt/mTOR通路，并在一定范圍內(nèi)（5mJ/cm2～30mJ/cm2）呈劑量依賴(lài)性，在一定范圍內(nèi)（5min～30min）呈時(shí)間依賴(lài)性。
　　 2.EGFR抑制劑PD153035預(yù)處理顯著抑制了UVB誘導(dǎo)的p-EGFR(1068)水平增加，同時(shí)也顯著抑制了UVB誘導(dǎo)的p-Akt(Ser473、T308)、p-S6 (S235/236)水平增加。
　　 3.PI3

5、K抑制劑LY 294002預(yù)處理能顯著抑制UVB誘導(dǎo)的p-Akt(Ser473)水平增加，同時(shí)也能抑制UVB誘導(dǎo)的p-4EBP1(S65)、p-S6(S235/236)、p-S6K(S235/236)水平增加。
　　 4.雷帕霉素預(yù)處理對(duì)p-AKT(Ser473)的水平無(wú)影響(P>0.05)，但能顯著抑制UVB誘導(dǎo)的p-4EBP1(S65)、p-S6(S235/236)、p-S6K(S235/236)水平增加。
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