長(zhǎng)期給予丙酸睪酮能夠激活老年大鼠腦內(nèi)Nrf2-ARE通路并改善其行為.pdf

1、衰老常涉及由進(jìn)行性氧化還原失衡導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷。氧化應(yīng)激會(huì)引起過多的氧自由基釋放，進(jìn)而引起運(yùn)動(dòng)行為進(jìn)行性紊亂。所以，通過抗氧化來治療運(yùn)動(dòng)行為障礙越來越引起人們的重視。在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，紅核因子2-聯(lián)系因子2(the nuclear factor erythoid2-related factor2，Nrf2)與抗氧劑效應(yīng)要素(antioxidant response element, ARE)之間相互綁定能夠使解毒酶Ⅱ合成，從而減輕氧化

2、應(yīng)激并減少毒性代謝產(chǎn)物的蓄積。在成年雄性大鼠和去勢(shì)大鼠的一生中，睪酮對(duì)他們的生理和運(yùn)動(dòng)行為都產(chǎn)生著影響。在對(duì)老齡大鼠施加丙酸睪酮后能否活化Nrf2-ARE信號(hào)通路還沒有報(bào)道。本文旨在通過對(duì)老年大鼠長(zhǎng)期皮下注射丙酸睪酮后，再通過傾斜面實(shí)驗(yàn)和水平繩實(shí)驗(yàn)，以及測(cè)定其氧化應(yīng)激參數(shù)，Nrf2和血紅素加氧酶-1(home oxygenase-1，HO-1)的表達(dá)，以及NADPH:苯醌氧化還原酶-1（quinine oxidoreductase-1，

3、NQO1）和腦內(nèi)酪氨酸羥化酶陽性細(xì)胞(tyrosinehydroxylase immunoreactive，TH-ir)的數(shù)量。我們的研究結(jié)果顯示長(zhǎng)期給予TP能夠明顯改善與衰老相關(guān)的平衡反應(yīng)和肌力降低。TP處理后的老年大鼠，氧化應(yīng)激參數(shù)明顯改善，Nrf2、HO-1和NQO1在蛋白或基因表達(dá)水平，以及黑質(zhì)和尾殼核內(nèi)的TH-ir細(xì)胞數(shù)量都明顯增加。我們的研究表明長(zhǎng)期給予TP治療能夠活化Nrf2-ARE信號(hào)途徑，從而影響和維持老年大鼠的平衡反

4、應(yīng)、肌肉力量并減少TH-ir細(xì)胞的死亡。所以，補(bǔ)充TP能夠治療和改善運(yùn)動(dòng)行為紊亂。
　　目的:觀察通過皮下途徑給予睪酮后，能否對(duì)老齡大鼠體內(nèi)的Nrf2-ARE信號(hào)通路的表達(dá)以及運(yùn)動(dòng)行為產(chǎn)生影響效果，并期望所獲得的結(jié)果為相關(guān)的神經(jīng)精神性疾病的發(fā)病以及治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:成年雄性Wistar大鼠共50只。其中45只隨機(jī)分成3組:24Mon-TP組(n=15)老年大鼠在21月齡時(shí)，每天5:00PM到6:00PM間給

5、予皮下注射丙酸睪酮(2 mg/kg)。24Mon組(n=15)大鼠在21月齡時(shí)，皮下注射作為溶質(zhì)的芝麻油，持續(xù)給藥3個(gè)月，到試驗(yàn)時(shí)兩組老年大鼠24月齡。6Mon組大鼠(n=15)在3月齡時(shí)給予皮下注射作為溶質(zhì)的芝麻油，持續(xù)給藥3個(gè)月，試驗(yàn)時(shí)6月齡。所有大鼠連續(xù)給予TP或溶質(zhì)12周（84天）。最后一組24Mon-N大鼠(n=5)不給予藥物處理，但與24Mon組接受同樣的行為學(xué)訓(xùn)練。行為學(xué)測(cè)試后，每組中隨機(jī)取出5只分別用于丙二醛(malon

6、dialdehyde，MDA)以及還原型谷胱甘肽(reduced glutathione，GSH)的測(cè)定，并且對(duì)免疫印跡和實(shí)時(shí)定量PCR以及免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　1、經(jīng)TP處理后大鼠平板試驗(yàn)的效果
　　24月齡大鼠的滑落角度與6月齡大鼠的滑落角度相比顯著降低，24月齡大鼠50°角滑落頻率相對(duì)6月齡大鼠顯著增加。24Mon-TP滑落角度與24Mon相比增加了10.4％(P＜0.01)，而且50°角滑落頻

7、率24Mon-TP也比24Mon減少了34.0％(P＜0.01)。24Mon-TP與6Mon相比滑落角度明顯減小，滑落頻率明顯變大。
　　2、TP對(duì)老年大鼠水平繩實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響
　　24Mon比6Mon懸吊時(shí)間明顯縮短。24Mon-TP比24Mon懸吊時(shí)間增加了103.7％。24Mon-TP懸吊時(shí)間仍明顯少于6Mon。
　　3、TP對(duì)老年大鼠體內(nèi)MDA和GSH水平的影響
　　24Mon組大鼠與6Mon組相比，其黑質(zhì)

8、和尾殼核中GSH的水平顯著下降，而MDA水平則顯著升高。24Mon-TP黑質(zhì)和尾殼核中GSH含量比24Mon組分別增加了24.5％(P＜0.01)和16.5％(P＜0.01)。24Mon-TP組大鼠黑質(zhì)和尾殼核中MDA水平比24Mon組分別下降了13.9％(P＜0.01)和13.4％(P＜0.01)。而24Mon-TP組黑質(zhì)和尾殼核中GSH和MDA的水平并未恢復(fù)到6Mon組水平。
　　4、Nrf2，HO-1 and NQO1蛋白的

9、表達(dá)情況
　　24Mon組大鼠黑質(zhì)以及CPu中Nrf2(P＜0.01)，HO-1(P＜0.01)和NQO1(P＜0.01)的含量與6Mon相比，明顯降低。24Mon-TP大鼠黑質(zhì)中Nrf2，HO-1和NQO1的含量比24Mon分別高了31.6％(P＜0.01)，30.3％(P＜0.01)和24.2％(P＜0.01)，且24Mon-TP組大鼠CPu中HO-1和NQO1的表達(dá)比24Mon分別高了36.8％(P＜0.01)和13.6％(

10、P＜0.01)。24Mon-TP組大鼠黑質(zhì)中Nrf2，HO-1和NQO1以及CPu中HO-1和NQO1的表達(dá)量并未達(dá)到6Mon大鼠水平。
　　5、Nrf2，HO-1及NQO1在mRNA水平的改變
　　24Mon大鼠Nrf2 rmRNA(P＜0.01),HO-1 mRNA(P＜0.01)和NQO1mRNA(P＜0.01)表達(dá)量與6Mon大鼠相比明顯減少。24Mon-TP大鼠Nrf2mRNA，HO-1 mRNA和NQO1 mRN

11、A表達(dá)量比24Mon大鼠分別高了21.4％(P＜0.01),19.2％(P＜0.01)和20.9％(P＜0.01)。24Mon-TP Nrf2mRNA，HO-1 mRNA和NQO1 mRNA表達(dá)量仍低于6Mon。
　　6、TP對(duì)老年大鼠TH陽性細(xì)胞數(shù)量的影響
　　24Mon大鼠TH-ir細(xì)胞數(shù)(P＜0.01）比6MonTH-ir細(xì)胞數(shù)少。24Mon-TP組TH-ir比24Mon組高了38.5％。24Mon-TP TH-ir數(shù)