大鼠腦出血后Nrf2-ARE信號(hào)通路對(duì)灶周神經(jīng)保護(hù)作用及內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞激活的機(jī)制研究.pdf

1、目的:第一部分:近期研究發(fā)現(xiàn)Nrf2(核轉(zhuǎn)錄因子-2)/ARE（抗氧化反應(yīng)元件）信號(hào)通路在體內(nèi)具有抗氧化應(yīng)激作用、抗炎性反應(yīng)和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用。本部分研究采用萊菔硫烷激活Nrf2-ARE信號(hào)通路，維甲酸抑制Nrf2-ARE信號(hào)通路，觀察Nrf2-ARE信號(hào)通路對(duì)腦出血灶周神經(jīng)保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制探索;第二部分:有文獻(xiàn)報(bào)道腦損傷后腦內(nèi)各部位有內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞激活和增殖，且向灶周損傷區(qū)域遷徙，但相關(guān)機(jī)制不明確。本部分研究腦出血后內(nèi)源性神經(jīng)干

2、細(xì)胞激活增殖及相關(guān)TGF-β機(jī)制的探討。
　　方法:第一部份:采用SD大鼠基底節(jié)自體動(dòng)脈血注射法建立腦出血模型，分四組:單純腦出血組、萊菔硫烷(Nrf2激活劑，SFN)處理腦出血組和維甲酸(RA，Nrf2抑制劑)處理腦出血和正常對(duì)照組，觀察不同時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)功能評(píng)分，取腦組織行免疫組化檢測(cè)，免疫熒光檢查及Western blot檢測(cè)Nrf2、HO-1、NF-κB表達(dá)。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，觀察腦出血灶周神經(jīng)保護(hù)的作用。第二部分:

3、采用SD大鼠基底節(jié)自體動(dòng)脈血注射法建立腦出血模型，隨機(jī)分成假手術(shù)組、單純腦出血實(shí)驗(yàn)組，分別按1d、7d、14d、21d分為4個(gè)亞組，觀察不同時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)功能評(píng)分，取腦組織行免疫熒光雙標(biāo)檢查Nestin與BrdU共表達(dá)情況，免疫組化TGF-β表達(dá)。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，觀察腦出血灶周神經(jīng)保護(hù)的作用。
　　結(jié)果:第一部份:SFN處理激活Nrf2大鼠組腦出血后與單純腦出血組比較，神經(jīng)功能障礙明顯減輕;與單純腦出血組及比較，SFN處理

4、激活Nrf2大鼠組免疫熒光、western blot檢測(cè)Nrf2轉(zhuǎn)錄因子、HO-1抗氧化蛋白表達(dá)均升高，于72h達(dá)高峰值，SFN處理激活Nrf2大鼠組NF-κB表達(dá)下降，免疫組化檢測(cè)腦出血小膠質(zhì)細(xì)胞活化明顯;RA處理腦出血組大鼠死亡率最高，神經(jīng)功能損傷嚴(yán)重，檢測(cè)Nrf2轉(zhuǎn)錄因子、HO-1抗氧化蛋白表達(dá)均較SFN干預(yù)組和單純腦出血組低，持續(xù)性抑制作用可能持續(xù)5天左右，RA處理抑制Nrf2大鼠組NF-莨B表達(dá)下降，免疫組化檢測(cè)提示腦出血小膠

5、質(zhì)細(xì)胞活化明顯且持續(xù)時(shí)間至5天。第二部分:本實(shí)驗(yàn)可觀察到:1）單純腦出血組免疫雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞于7d開始有表達(dá)，持續(xù)性增多至21d，2）而假手術(shù)組較單純腦出血組在7d、14d、21d免疫雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。說明腦出血后的確有內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的激活增殖。3）假手術(shù)組TGF-β在細(xì)胞質(zhì)中有較少的表達(dá)。單純腦出血組TGF-β陽(yáng)性細(xì)胞在1d時(shí)無(wú)明顯增多，于3d開始增多，可見大量漿著色的陽(yáng)性細(xì)胞，7d達(dá)高峰，持續(xù)性增多

6、至21d。說明腦出血后TGF-β的表達(dá)與內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)，可能參與內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的激活增殖。
　　結(jié)論:1）大鼠腦出血后存在急性炎癥損傷;2）萊菔硫烷激活Nrf2-ARE信號(hào)通路可提高HO-1、NQO1抗氧化酶表達(dá)，減輕腦出血后灶周炎性反應(yīng)，提高神經(jīng)保護(hù)作用;3）小膠質(zhì)細(xì)胞在腦出血早期活化后具有神經(jīng)毒性作用;4）腦出血后有ENSCs激活、增殖，于7-21天呈逐漸增多的趨勢(shì);5）TGF-β信號(hào)通路可能參與腦出血后ENSCs激活