脊髓損傷大鼠觸液神經(jīng)元與內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)性研究.pdf

1、目的:通過探索成年大鼠脊髓損傷前后接觸腦脊液神經(jīng)元（ spinal fluid-contacting neurons，CSF-CNs）、內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞（Endogenous Neural Stem Cells，ENSCs），兩者數(shù)量、分布情況，分析兩種細(xì)胞之間的相關(guān)性，開辟“通過CSF-CNs的作用誘導(dǎo)受損脊髓ENSCs增殖分化從而修復(fù)脊髓功能”這一治療途徑。
　　方法:成年健康 SD大鼠60只，由貴州醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中提供。隨

2、機(jī)分為對照組20只（n=20）和脊髓損傷組40只（n=40）。在大鼠腦立體坐標(biāo)定位后，對兩組大鼠的單側(cè)側(cè)腦室進(jìn)行注射。均一次性注射霍亂毒素亞單位B結(jié)合辣根過氧化酶（Cholera toxin B subunit conjugated horseradish peroxidase，CB-HRP）3μg，注射后繼續(xù)飼養(yǎng)大鼠2d。觀察大鼠生命體征并評價(jià)運(yùn)動情況。大鼠全麻下，采用鉗夾方式建立大鼠脊髓損傷動物模型，根據(jù)BBB評分標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)受傷大鼠的

3、運(yùn)動功能，并繼續(xù)飼養(yǎng)大鼠。在術(shù)后1d、3d、7d、14d、28d時(shí)間點(diǎn)，同時(shí)采用灌注處死兩組大鼠，然后進(jìn)行損傷脊髓組織及腦組織取材并制作標(biāo)本。石蠟包埋、切片，加一抗、熒光二抗染色，行CB-HRP和 Nestin免疫熒光雙標(biāo)。在熒光顯微鏡下應(yīng)用數(shù)字照相技術(shù)分析圖像中熒光光密度值，采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，從而得到CSF-CNs與 ENSCs的數(shù)量、分布情況變化，采用再分析二者之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：CSF-C

4、Ns與ENSCs在部位上具有一定的相同來源。大鼠脊髓、腦組織中CSF-CNs的數(shù)量在脊髓損傷前后有明顯變化，即損傷以前相對較少，損傷后明顯增加，兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；大鼠脊髓、腦組織中內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量在脊髓損傷后有明顯變化，同樣為損傷以前相對較少，損傷后明顯增加，兩者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在脊髓損傷組大鼠的 CB-HRP與 Nestin雙標(biāo)神經(jīng)元圖像中，脊髓中央管附近和側(cè)腦室附近觀測到紅、綠色雙標(biāo)的有核細(xì)胞，呈雙極或多極神經(jīng)元形態(tài)，分