神經(jīng)干細(xì)胞及神經(jīng)元對(duì)脊髓損傷的作用.pdf

1、第一部分神經(jīng)干細(xì)胞及原代神經(jīng)元的分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)一Wistar大鼠腦的神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定目的:1、探討Wistar大鼠的神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定方法.2、為脊髓橫斷模型的細(xì)胞移植提供足夠的神經(jīng)干細(xì)胞.結(jié)果:接種后,許多單個(gè)圓形細(xì)胞懸浮生長(zhǎng),直徑約為20-30um,并且作著快速的旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng),其速度有快有慢.細(xì)胞懸浮生長(zhǎng),周?chē)休^強(qiáng)的光暈.12小時(shí),部分細(xì)胞出現(xiàn)有絲分裂相;24小時(shí),部分圓形細(xì)胞一分為二;7-8天,細(xì)胞分裂形成細(xì)胞團(tuán).免

2、疫細(xì)胞化學(xué)的結(jié)果顯示,圓形細(xì)胞表現(xiàn)為Nestin反應(yīng)陽(yáng)性,GFAP,NF-160反應(yīng)陰性實(shí)驗(yàn)二皮層原代神經(jīng)元的分離培養(yǎng)和誘導(dǎo)分裂.目的:1、探討Wistar大鼠的神經(jīng)元的分離培養(yǎng)與鑒定方法.2、為脊髓橫斷模型的細(xì)胞移植提供足夠的神經(jīng)元.結(jié)果:接種6-12小時(shí),細(xì)胞貼壁,呈圓形或橢圓形,細(xì)胞周?chē)忻黠@的光暈2-3天后,細(xì)胞明顯增大,突起數(shù)增多,伸長(zhǎng).加入阿糖胞苷后培養(yǎng)三天,分裂細(xì)胞死亡,漂浮起來(lái)形成細(xì)胞團(tuán).除去阿糖胞苷,繼續(xù)培養(yǎng)10天左右

3、,神經(jīng)元的細(xì)胞核和核仁清晰可見(jiàn),神經(jīng)突起多而粗大,網(wǎng)絡(luò)稠密.并且有許多神經(jīng)元出現(xiàn)雙核,分裂生成兩個(gè)神經(jīng)元MAP2+PI雙標(biāo)記呈陽(yáng)性反應(yīng).實(shí)驗(yàn)三神經(jīng)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染與神經(jīng)元HONC腿ST染色目的:1.探討:神經(jīng)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法與神經(jīng)元的HONCHEST染色方法.2.為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞移植與追蹤提供細(xì)胞.結(jié)論:通過(guò)第一部分的實(shí)驗(yàn)我們進(jìn)一步完善了神經(jīng)干細(xì)胞及神經(jīng)元的培養(yǎng)方法,并成功的進(jìn)行了神經(jīng)干細(xì)胞的GFP轉(zhuǎn)染及神經(jīng)元的HONCHEST染色.第二部

4、分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分目的:1.探討細(xì)胞移植的方法與途徑.2.探討神經(jīng)干細(xì)胞對(duì)脊髓損傷與修復(fù)的作用與機(jī)制.3.探討神經(jīng)元對(duì)脊髓損傷與修復(fù)的作用與機(jī)制.4.比較二者的差別.結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)神經(jīng)干細(xì)胞及原代神經(jīng)元的培養(yǎng)成功獲取了高純度的細(xì)胞,其中神經(jīng)干細(xì)胞可穩(wěn)定傳代并形成克隆.利用獲得的細(xì)胞進(jìn)行脊髓損傷移植實(shí)驗(yàn)證實(shí)神經(jīng)干細(xì)胞對(duì)脊髓的損傷修復(fù)具有明顯作用,而移植的神經(jīng)元(原代培養(yǎng))盡管證明在動(dòng)物體內(nèi)存活并發(fā)生遷移,但行為學(xué)指標(biāo)移植的4周內(nèi)并無(wú)明顯作用