嗅鞘細(xì)胞對(duì)正常及損傷脊髓神經(jīng)元的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：研究嗅鞘細(xì)胞（olfactoryensheathingcells，OECs）的培養(yǎng)液對(duì)正常及損傷大鼠脊髓神經(jīng)元的影響，進(jìn)一步探討OECs促進(jìn)及保護(hù)脊髓神經(jīng)元的作用機(jī)制。
　　方法：取成年SD大鼠分離制備OECs，對(duì)OECs行低親和力神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體抗體（rabbit-anti-ratlow-affinitynervegrowthfactorreceptorp75,NGFRp75）細(xì)胞免疫組織化學(xué)鑒定，并制備嗅鞘細(xì)胞培養(yǎng)液（o

2、lfactoryensheathingcellculturemedium，OECCM）；取孕15～17dSD大鼠制備胚胎SD大鼠脊髓神經(jīng)元；以雙氧水（H2O2）制備大鼠脊髓神經(jīng)元損傷模型。實(shí)驗(yàn)分兩組：（1）對(duì)照組（DMEM/F12完全培養(yǎng)基，A組）和OECCM組（B組）分別作用于正常脊髓神經(jīng)元，觀察分析這兩組脊髓神經(jīng)元生長(zhǎng)指標(biāo)及細(xì)胞活性的差異；（2）對(duì)照組（DMEM/F12完全培養(yǎng)基，C組）和OECCM組（D組）分別作用于經(jīng)H2O2致傷

3、的脊髓神經(jīng)元，觀察其細(xì)胞活性的差異。結(jié)果：OECs培養(yǎng)6～9d后，細(xì)胞大多呈雙極形或梭形；正常脊髓神經(jīng)元胞體較大，多成圓形，培養(yǎng)5～7d后，突起明顯生長(zhǎng)，多為雙突起。NGFRP75細(xì)胞免疫組化示OECs細(xì)胞膜棕色深染，胞體清晰，呈梭性或三角形，OECs培養(yǎng)純度>80％。（1）正常脊髓神經(jīng)元培養(yǎng)6～9d后，分別加入DMEM/F12完全培養(yǎng)基（對(duì)照組，A組）及OECCM（實(shí)驗(yàn)組，B組）培養(yǎng)3天，分別測(cè)量?jī)山M細(xì)胞胞體平均直徑、單個(gè)神經(jīng)元突起數(shù)

4、目、細(xì)胞突起長(zhǎng)度及MTT比色A值，對(duì)照組（A組）為（33.38±6.80）D/μm、（1.67±0.80）個(gè)和（91.19±62.64）L/μm、0.4020±0.5869；OECCM組（B組）為（37.39±7.28）D/μm、（1.76±0.82）個(gè)、（121.33±81.13）L/μm、0.4660±0.4790。兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05、P<0.01）。（2）以H2O2制備脊髓神經(jīng)元損傷模型，損傷后2h見(jiàn)，神經(jīng)元數(shù)

5、量明顯減少、胞體皺縮，細(xì)胞突起明顯回縮或斷裂。分別加入DMEM/F12完全培養(yǎng)基（對(duì)照組，C組）及OECCM（實(shí)驗(yàn)組，D組）培養(yǎng)3天，分別檢測(cè)兩組MTT比色A值，對(duì)照組(C組)為0.1490±0.0300；OECCM組（D組）為0.1840±0.0520，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)論：OECs培養(yǎng)液可促進(jìn)正常脊髓神經(jīng)元生長(zhǎng)，對(duì)損傷脊髓神經(jīng)元起到一定程度的保護(hù)作用，OECs分泌的促神經(jīng)生長(zhǎng)因子是OECs發(fā)揮脊