不同來源嗅鞘細(xì)胞治療脊髓損傷模型效果及機制的研究.pdf

1、目的：體外分離、培養(yǎng)不同來源嗅鞘細(xì)胞，并鑒定其生物學(xué)特性，比較不同來源的嗅鞘細(xì)胞生物活性，評價其對脊髓損傷模型小鼠的療效的差異和修復(fù)機制研究。
　　方法：差速貼壁法分別培養(yǎng)嗅球和嗅粘膜來源的嗅鞘細(xì)胞，免疫熒光染色檢測該細(xì)胞特異性蛋白S100、P75的表達，并對二者生長曲線及在不同代次、不同濃度梯度條件下神經(jīng)營養(yǎng)因子分泌情況進行檢測，實時定量PCR（qRT_PCR）鑒定二者腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、神經(jīng)

2、營養(yǎng)因子3（NT-3）、神經(jīng)營養(yǎng)因子4（NT-4）、軸突膜蛋白（GAP-43）、微管相關(guān)蛋白（MAP-2）基因表達，并分別將兩種細(xì)胞移植入脊髓橫斷小鼠模型中，以小鼠神經(jīng)功能評分及脊髓內(nèi)移植細(xì)胞分布情況進行評估；分別在細(xì)胞移植后1周及2周觀察兩種來源嗅鞘細(xì)胞的體內(nèi)遷移;采用免疫熒光染色檢測移植后脊髓組織BDNF的表達；利用免疫組織化學(xué)染色檢測移植后脊髓組織capase3的表達。
　　結(jié)果：所獲得不同來源的嗅鞘細(xì)胞呈雙極、三極樣形態(tài)生

3、長，且S100、P75蛋白表達均為陽性，嗅黏膜來源細(xì)胞不表達MAP-2，高表達GAP-43，嗅球來源的細(xì)胞低表達MAP-2和GAP-43，嗅球來源細(xì)胞生長活性大于嗅粘膜來源細(xì)胞，其中嗅粘膜細(xì)胞來源分泌營養(yǎng)因子高于嗅球來源細(xì)胞，小鼠神經(jīng)功能評分顯示嗅黏膜來源細(xì)胞治療脊髓損傷模型效果明顯高于嗅球來源嗅鞘細(xì)胞。嗅黏膜來源嗅鞘細(xì)胞從注射點向損傷處逐漸遷移，而嗅球來源細(xì)胞未見遷移；嗅黏膜來源嗅鞘細(xì)胞在移植一周后BDNF陽性細(xì)胞數(shù)多于嗅球來源，嗅球