通過三點飽和突變定向進化AtGSTZ.pdf

1、飽和突變技術通過構建突變文庫可以對結構和功能知之甚少的蛋白質特性的重要方法，也是實驗室中改造/優(yōu)化基因常用的手段。谷胱甘肽巰基轉移酶(GSTs)是一種廣泛存在的對細胞有重要解毒作用的蛋白酶家族，具有細胞內化合物的解毒作用。擬南芥Zeta，類谷胱甘肽S-轉移酶(AtGSTZ)對于自來水中的強致癌物質二氯乙酸(DCA)具有專一性的降解功能。在近期的研究中，大量報道集中于保守位點的相關研究，但是保守位點的突變往往導致酶的失活。
　　

2、本文旨在通過對保守區(qū)域內保守位點附近的非保守位點進行飽和突變，篩選出活力提高的突變株，減少保守位點改變帶來的負面影響。參考已報道的谷胱甘肽S-轉移酶關鍵位點相關研究，通過同源比對，選取了Asn71、Leu108、Gly177三個可能對該酶活性有較大影響的位點進行研究，針對這三個位點構建AtGSTZs三點飽和突變文庫。在三個目的位點處設計兼并引物，三點飽和突變文庫的構建采用交錯延伸PCR技術，從該突變庫中率選出活力較高的突變株進行動力學測