人胰島移植純化技術(shù)的研究.pdf

1、目的：
　　糖尿病已經(jīng)成為人類健康的嚴(yán)重威脅。胰島移植在2000年Edmonton方案發(fā)布以后，已逐漸成為一項成熟的技術(shù)，成為治療1型糖尿病和逆轉(zhuǎn)糖尿病慢性并發(fā)癥的有效方法。本實驗旨在建立合適的人胰島移植純化方案，摸索純化液的配置方法，為開展臨床胰島移植奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　獲取成人尸體胰腺，修剪后將胰腺剪成兩段，從胰管內(nèi)插管灌注消化液。待胰腺膨脹后剪成小塊，在Ricordi腔室系統(tǒng)內(nèi)循環(huán)消化，收集的組織經(jīng)孵育后

2、使用連續(xù)密度梯度法，分別用COBE2991細(xì)胞分離機和改良后的大瓶離心法純化。對純化后的胰島經(jīng)雙硫腙(DTZ)染色后計算胰島當(dāng)量(IEQ)、純度及胰島回收率。
　　結(jié)果：
　　共實施九次胰島分離純化，前八次只使用COBE2991機進行分離純化，純化結(jié)果不理想算作失敗。第九次嘗試使用改良后的大瓶離心法，其中一半胰腺消化產(chǎn)物使用COBE2991純化，另一半采用改良后的大瓶離心法純化。結(jié)果胰腺組織重78.8g，純化前胰島當(dāng)量為94

3、6000 IEQ。使用COBE機純化后的胰島當(dāng)量為254600 IEQ，純度64％;而使用改良后的大瓶離心法純化后的724300 IEQ，純度90％;使用COBE機純化的每克胰腺胰島產(chǎn)量為3231 IEQ/g，而改良后大瓶離心法純化后的9192 IEQ/g。使用COBE機純化的胰島回收率為26.9％，而使用改良后大瓶離心法的胰島回收率為76.5％。
　　結(jié)論：
　　已掌握使用COBE2991純化胰島的技術(shù)。使用改良后的大瓶離