生長抑素減輕小鼠胰島移植過程中胰腺外分泌細胞對移植胰島損傷的研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分進行闡述：
　　第一部分 小鼠胰島分離、純化及功能檢測
　　目的:分離純化小鼠胰島。
　　方法:采用膽總管逆行灌注膠原酶的方法來分離純化小鼠胰島，同時使用雙硫腙、臺盼藍以及葡萄糖刺激實驗來檢驗胰島的功能。
　　結果:每只小鼠可獲150左右個胰島，活性及純度都大于90％。葡萄糖刺激實驗表明胰島功能正常。
　　結論:采用課題組已經(jīng)成熟的實驗方法，可以獲得高純度、功能良好的胰島。
　　第

2、二部分 糖尿病小鼠左腎被膜下胰島細胞與胰腺外分泌細胞共同移植動物模型的建立
　　目的:建立糖尿病小鼠左腎被膜下同種異體胰島細胞與胰腺外分泌細胞共同移植動物模型及探討胰腺外分泌細胞對胰島移植物的損傷作用。
　　方法:鏈脲佐菌素腹腔注射誘導BALB/C小鼠成為糖尿病小鼠。單純移植組(n=10)每只小鼠于左腎被膜上極移植胰島細胞250個，共同移植組(n=10)每只小鼠于左腎被膜上下極同時移植胰島細胞250個和等體積的胰腺外分泌細胞

3、，持續(xù)觀測血糖及生命體征變化，1個月后切除左腎并繼續(xù)檢測血糖。
　　結果:(1)胰島移植后，單純移植組及共同移植組血糖均逐步降至正常，共同移植組較單純移植組血糖恢復正常時間延遲，移植術后第2、3、4、5d，單純移植組受鼠血糖低于共同移植組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。切除兩組受鼠左腎3d后，兩組受鼠血糖均＞21mmol/L。
　　結論:(1)成功建立糖尿病小鼠左腎被膜下同種異體胰島細胞與胰腺外分泌細胞共同移植動物模型。

4、(2)胰腺外分泌細胞與胰島細胞同時移植會延遲植入胰島功能恢復正常的時間。
　　第三部分 生長抑素減輕小鼠胰島移植過程中胰腺外分泌細胞對移植胰島損傷的研究
　　目的:探討生長抑素如何減輕胰腺外分泌細胞對移植胰島的損傷及其機制。
　　方法:(1)體外實驗:選取20只雄性BALB/C小鼠，隨機分為實驗組(n=10)和對照組(n=10)，麻醉前30分鐘實驗組按10ug/g腹腔注射生長抑素，對照組注射等量的生理鹽水，然后分別收集

5、兩組小鼠的胰腺外分泌細胞及胰島細胞，流式細胞儀檢測兩種細胞凋亡情況。(2)體內實驗:鏈脲佐菌素腹腔注射誘導BALB/C小鼠成為糖尿病小鼠。實驗組(n=20)和對照組(n=20)分別于小鼠左腎被膜上下級同時移植250個胰島和等體積的胰腺外分泌細胞，術后實驗組按10ug/g，tid，腹腔注射生長抑素28天，對照組注射等量生理鹽水28天，同時兩組小鼠分別按5ug/g，qd，腹腔注射EDU28天，移植術后8天實驗組和對照組小鼠分別進行IPGTT

6、實驗，移植術后10天及28天兩組各隨機選取10只小鼠分別切除左腎，免疫組織化學法檢測左腎包膜下抗淀粉酶抗體的表達，免疫熒光染色法檢測移植胰島β細胞增殖情況，并繼續(xù)檢測血糖。
　　結果:(1)流式檢測結果顯示實驗組小鼠胰腺外分泌細胞凋亡率明顯高于對照組(P＜0.05)，胰島細胞凋亡率較對照組沒有明顯差別(P＞0.05)，(2)胰島移植后，兩組小鼠血糖均降至正常，對照組較實驗組血糖恢復正常時間延遲(P＜0.05)，對照組的血糖平均水平

7、明顯高于實驗組;IPGTT實驗結果顯示移植物血糖調節(jié)功能正常;術后10天實驗組和對照組移植物周圍均可見抗淀粉酶抗體陽性顆粒，但實驗組陽性顆粒數(shù)較對照組減少(P＜0.05)，免疫熒光檢測顯示實驗組移植胰島Insulin+/EDU+β細胞數(shù)較對照組明顯增多(P＜0.05)。術后28天，實驗組抗淀粉酶抗體陽性顆粒數(shù)較對照組明顯減少(P＜0.05)，但各組數(shù)量與移植術后10天相比均無明顯差別(P＞0.05)，實驗組增值的β細胞數(shù)仍明顯高于對照組

8、(P＜0.05)，但與移植術后10天相比，各組增殖率均降低(P＜0.05)。
　　結論:(1)生長抑素可以誘導小鼠胰島移植過程中損傷的胰腺外分泌細胞凋亡，而對胰島細胞凋亡沒有影響。(2)移植術后早期（10天之內），生長抑素可以明顯抑制胰腺外分泌細胞胰淀粉酶的分泌，促進胰島β細胞增殖，10天至28天，生長抑素仍可抑制胰腺外分泌細胞胰淀粉酶的分泌，但對胰島β細胞增殖沒有影響，(3)在胰島移植過程中使用生長抑素可以減輕小鼠胰腺外分泌細胞