博爾納病病毒感染對(duì)新生大鼠海馬中神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)MicroRNAs的影響.pdf

1、背景及目的：
　　博爾納病病毒（Borna Disease Virus，BDV）是一種非分節(jié)段單股負(fù)鏈RNA病毒，具有高度嗜神經(jīng)性,不僅可能使神經(jīng)系統(tǒng)來源細(xì)胞株形成持續(xù)性的非細(xì)胞溶解性感染，而且可以使人類感染暴發(fā)流行腦炎，也很容易使動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)尤其是邊緣系統(tǒng)(如海馬)受到感染，產(chǎn)生如焦慮、過度興奮、攻擊、異常游戲行為及認(rèn)知缺陷等類似于人類精神分裂癥、孤獨(dú)癥等情感障礙疾病的宿主行為障礙。
　　微小RNA(MicroRNA

2、s, miRNAs)是一類新發(fā)現(xiàn)的非編碼小RNA分子，它們能夠通過與靶基因mRNA上的特定序列結(jié)合抑制靶基因的翻譯或剪切，進(jìn)而參與到各種生物學(xué)過程,包括發(fā)育、細(xì)胞分化、腫瘤生長(zhǎng)等。許多miRNA與病毒復(fù)制、增殖以及細(xì)胞的應(yīng)答等有關(guān)。
　　miRNA芯片技術(shù)通過對(duì)miRNA表達(dá)譜進(jìn)行高通量的全面分析，提供一系列數(shù)據(jù)信息，有助于從中提煉出新的假說，揭示疾病的分子機(jī)制。
　　研究 miRNA在宿主抗病毒感染過程中所起的作用，可能會(huì)

3、為miRNA與病毒感染的研究提供新的途徑。本課題旨在研究 BDV病毒對(duì)新生SD大鼠海馬中miRNA表達(dá)及生物學(xué)功能的影響。
　　方法：
　　1、選用出生后24 h內(nèi)的新生SD大鼠，顱內(nèi)接種病毒滴度為2×105 FFU/ml的BDV Hu-H1病毒液，構(gòu)建神經(jīng)發(fā)育障礙模型（BDV組或CON組），并用等量PBS液接種作為正常對(duì)照組（CON組）。
　　2、感染56 d后，分離出20只（10只/組）大鼠的海馬。
　　3、

4、8只（4只/組）海馬用Trizol法提取出miRNA后，進(jìn)行芯片檢測(cè)和生物信息學(xué)分析，初步篩選出顯著性異常表達(dá)的miRNA。
　　4、6只（3只/組）海馬用Qiagen試劑盒提取出miRNA后，進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè)，進(jìn)一步驗(yàn)證初步篩選出的miRNA。
　　結(jié)果：
　　1、miRNA芯片檢測(cè)初步篩選出9個(gè)顯著性異常表達(dá)的miRNA。與CON組相比，BDV組7個(gè)miRNA(miR-145*, miR-146a*, miR

5、-192*, miR-200b, miR-223*, miR-449a和miR-505)顯著性上調(diào)，2個(gè)miRNA(miR-126和miR-374)顯著性下調(diào)。
　　2、RT-qPCR進(jìn)一步驗(yàn)證后，5個(gè)(miR-126, miR-200b, miR-374, miR-449a和 miR-505)顯著性下調(diào)(P<0.05)，其余4個(gè)(miR-145*,miR-146a*, miR-192*, miR-223*)沒有顯著性變化。