大鼠牙囊細(xì)胞膜片聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維共培養(yǎng)促進(jìn)牙周組織再生的初步研究.pdf

1、目的：
　　探討聯(lián)合應(yīng)用牙囊細(xì)胞(rDFCs)膜片與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(rBMSCs)三維共培養(yǎng)促進(jìn)牙周組織缺損重建的可行性。
　　方法：
　　1.rDFCs、rBMSCs的體外分離、培養(yǎng)和鑒定。
　　2.rDFCs膜片的構(gòu)建和檢測(cè)。將第3代rDFC接種到溫度敏感培養(yǎng)皿中，用含有80μg/ml抗壞血酸成膜誘導(dǎo)液連續(xù)誘導(dǎo)2周，檢測(cè)細(xì)胞膜片生物學(xué)活性。行HE染色鑒定。
　　3.rBMSCs復(fù)合 nHA-PLGA支

2、架材料三維聚合體的構(gòu)建與檢測(cè)。取生長(zhǎng)良好的第3代rBMSCs按5*105密度接種于nHA-PLGA支架材料，靜置培養(yǎng)6天。掃面電鏡觀察細(xì)胞在支架上的黏附生長(zhǎng)情況。
　　4. rDFCs膜片包裹“rBMSCs-nHA-PLGA支架材料三維聚合體”進(jìn)行體內(nèi)移植。通過rDFC細(xì)胞膜片包裹已接種有rBMSCs的nHA-PLGA支架材料組成的細(xì)胞-支架三維聚合體，并將其貼合固定于預(yù)制牙本質(zhì)片后植入裸鼠皮下，研究組織再生情況。實(shí)驗(yàn)分組：1.牙

3、本質(zhì)片+nHA-PLGA;2.牙本質(zhì)片+nHA-PLGA-rBMSCs聚合體；3.牙本質(zhì)片+nHA-PLGA-rBMSCs聚合體+rDFC細(xì)胞膜片。于第8周處死實(shí)驗(yàn)對(duì)象，收集標(biāo)本，分別進(jìn)行HE和MASSON染色。
　　結(jié)果：
　　1.成功分離培養(yǎng)大鼠DFCs、BMSCs，并鑒定。
　　2.rDFCs細(xì)胞膜片HE染色結(jié)果顯示rDFC細(xì)胞膜片具有一定的厚度，細(xì)胞層數(shù)為2-5層，細(xì)胞基質(zhì)分泌豐富。
　　3.rBMSCs

4、接種 nHA-PLGA支架材料電鏡掃描結(jié)果顯示 rBMSCs能黏附于nHA-PLGA支架材料生長(zhǎng)，且生長(zhǎng)狀態(tài)良好。
　　4. rDFCs細(xì)胞膜片復(fù)合nHA-PLGA支架材料與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維聚合體裸鼠皮下移植收集標(biāo)本，HE及Masson染色結(jié)果顯示：組3中牙本質(zhì)片與支架材料間有一細(xì)胞條帶，有似牙周膜的纖維樣組織生成，支架材料側(cè)有類骨組織及新鮮血管形成。組2中牙本質(zhì)片與支架材料間亦有少量纖維樣組織生成，支架材料有吸收，無骨樣組織