糖尿病腎病腎組織巨噬細(xì)胞表型特征及TREM-1在其中的作用機(jī)制探討.pdf

1、異質(zhì)性和可塑性是巨噬細(xì)胞的重要特征。目前認(rèn)為，經(jīng)典激活巨噬細(xì)胞(M1)主要發(fā)揮組織炎癥以及損傷作用，而替代激活巨噬細(xì)胞(M2)剡參與抗炎以及組織修復(fù)進(jìn)程。腎組織中巨噬細(xì)胞浸潤是糖尿病腎病(DN)重要病理學(xué)特征，然而巨噬細(xì)胞M1/M2表型轉(zhuǎn)化在DN發(fā)生、發(fā)展中的具體作用尚未明確闡明。髓系細(xì)胞觸發(fā)受體TREM-1表達(dá)于巨噬細(xì)胞表面，參與觸發(fā)以及擴(kuò)大炎癥反應(yīng)。近期研究發(fā)現(xiàn)，在UUO模型中，TREM-1能夠調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型，參與疾病的進(jìn)展，但T

2、REM-1在DN中是否具有類似作用尚未明確。
　　目的：
　　本研究旨在探討各病理階段糖尿病腎病患者腎組織巨噬細(xì)胞表型特征及其與組織功能學(xué)改變關(guān)系，并通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)探討TREM-1在高糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞M1/M2表型轉(zhuǎn)化中的作用。
　　方法:
　　選取東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院腎臟病研究所2011-2015年通過腎活檢診斷為DN的46例腎組織作為實(shí)驗(yàn)組并收集腎活檢前的臨床資料包括血肌酐、24小時(shí)尿蛋白定量。按照DN病理

3、分型標(biāo)準(zhǔn)將腎組織病理損害分為Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ期。另取4例因腎外傷或腎腫瘤切除的患腎中的正常腎組織作為對(duì)照組。PAS染色觀察腎臟病理改變;免疫組化法檢測腎組織CD68+（巨噬細(xì)胞標(biāo)志物），MR+（M2標(biāo)志物）巨噬細(xì)胞數(shù)量以及TREM-1表達(dá);免疫熒光法檢測腎組織(iNOS+CD68)+(M1標(biāo)志物)巨噬細(xì)胞表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)采用高濃度葡萄糖(25mM)干預(yù)小鼠巨噬細(xì)胞系(RAW264.7)，RT-PCR和Western blot分別檢測

4、M1標(biāo)志物iNOS，M2標(biāo)志物MR以及TREM-1的表達(dá)，并通過siRNA沉默TREM-1，再次用上述方法檢測M1和M2各標(biāo)志物表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)CD68、M1巨噬細(xì)胞在腎小球和腎間質(zhì)均有浸潤，而M2巨噬細(xì)胞主要浸潤于腎間質(zhì)。與對(duì)照組相比，DN組腎組織CD68、M1、M2巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量明顯增加(P＜0.05)，且呈病程依賴性(P＜0.05)。
　　(2)DN患者腎小球和腎間質(zhì)CD68、M1、M2浸潤數(shù)

5、量分別與24小時(shí)尿蛋白定量以及血肌酐成正相關(guān)。
　　(3)進(jìn)一步探討DN各個(gè)病理階段腎組織巨噬細(xì)胞M1/M2活化表型發(fā)現(xiàn)，DN早期(Ⅰ+Ⅱa)階段，腎組織中浸潤巨噬細(xì)胞主要是M1表型(P＜0.05)，此時(shí)M1與M2比值達(dá)到最大值，相反，在DN晚期(Ⅲ)階段，腎組織中浸潤巨噬細(xì)胞主要是M2表型(P＜0.05)，此時(shí)M1與M2比值達(dá)到最低值。
　　(4)DN組TREM-1主要表達(dá)于腎間質(zhì)，并且隨著疾病進(jìn)展，表達(dá)不斷增加(P＜0.

6、05)。(5)體外研究發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，25mmol/L葡萄糖干預(yù)RAW264.7細(xì)胞24h后，RT-PCR和Western blot結(jié)果均顯示巨噬細(xì)細(xì)胞TREM-1以及M1標(biāo)志物iNOS表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)，而M2標(biāo)志物MR的表達(dá)則顯著下降(P＜0.05)。siRNA沉默TREM-1后，高糖的上述作用均被抑制(iNOS mRNA:高糖組與基因敲除組比較5.048±0.645 vs2.260-±0.062，P＜0.05; MR mR