糖腎合劑干預(yù)糖尿病大鼠腎臟巨噬細(xì)胞變化治療糖尿病腎病的研究.pdf

1、目的:觀察糖尿病大鼠腎臟組織中M1型、M2型巨噬細(xì)胞及炎癥介質(zhì)腫瘤壞死因子-α的變化;通過(guò)糖腎合劑及拆方干預(yù)DN大鼠模型，觀察糖腎合劑對(duì)腎組織中不同表型巨噬細(xì)胞的影響，探討糖腎合劑治療DN的機(jī)制。
　　方法:高脂飲食聯(lián)合低劑量鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立DN大鼠模型。成模后的大鼠隨機(jī)分為模型組(MX)，糖腎高組(TG)、糖腎低組(TD)、解毒高組(DG)、解毒低組(DD)、黃芪高組(HG)、黃芪低組(HD)、阿托伐他汀組(AT

2、)。各治療組予以相應(yīng)的治療藥物灌胃，模型組和正常組予以生理鹽水灌胃。記錄成模時(shí)和藥物干預(yù)后大鼠的體重、血糖;檢測(cè)藥物干預(yù)后的尿蛋白定量、血清白蛋白、肌酐、尿素氮、總膽固醇;蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測(cè)腎皮質(zhì)蛋白中M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物（誘導(dǎo)型一氧化氮合酶iNOS）、M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物(CD163)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達(dá);光鏡下觀察經(jīng)蘇木素伊紅染色(HE)的腎組織病理改變;免疫組化測(cè)iNOS、CD163在腎

3、小球內(nèi)的陽(yáng)性染色表達(dá)。應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。
　　結(jié)果:(1)24小時(shí)尿蛋白定量:模型組、解毒高組、黃芪高組、黃芪低組、阿托伐他汀組均高于正常組;模型組明顯高于糖腎高組、糖腎低組、解毒高組、解毒低組、黃芪高、低組、阿托伐他汀組(P＜0.01);糖腎高組、糖腎低組尿蛋白定量低于解毒組、黃芪組(P＜0.05);糖腎高組、糖腎低組、解毒高組、黃芪高組治療效果優(yōu)于阿托伐他汀組(P＜0.05)。
　　(2)血清白蛋白

4、:與正常組相比，模型組血清白蛋白水平明顯降低(P＜0.01);與模型組相比，糖腎高、低組、解毒高、低組、黃芪高、低組、阿托伐他汀組均可升高DN大鼠血清白蛋白;糖腎高、低組白蛋白較阿托伐他汀組升高(P＜0.05)。
　　(3)腎功能:與正常組相比，模型組肌酐、尿素氮明顯升高(P＜0.01);與模型組相比，糖腎高組、糖腎低組血清肌酐、尿素氮均出現(xiàn)下降(P＜0.05);與阿托伐他汀組相比，糖腎高組、糖腎低組血清肌酐、尿素氮有所下降，但無(wú)

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。黃芪高、低組、解毒高、低組與模型組相比，肌酐、尿素氮未見(jiàn)明顯下降。
　　(4)血清膽固醇:模型組高于正常組(P＜0.05);阿托伐他汀組、糖腎高、低組、解毒高組低于模型組(P＜0.05);各治療組與阿托伐他汀組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05).
　　(5)腎臟病理:HE染色可見(jiàn)模型組大鼠腎小球體積增大，球囊囊壁增厚，部分粘連，腎小球毛細(xì)血管叢有分葉，小球內(nèi)系膜基質(zhì)增生，局部中-重度增生，基底膜增

6、厚，部分區(qū)域腎小球局灶硬化;腎小管上皮變性、脫落，腎小管局灶擴(kuò)張，間質(zhì)纖維化，并可見(jiàn)散在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。糖腎高組腎小球改變輕微，未見(jiàn)明顯硬化腎小球，系膜輕度增生;少量小管輕度擴(kuò)張、萎縮，少許區(qū)域見(jiàn)灶性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)纖維化形成。糖腎低組腎小球系膜輕-中度增生，球囊局灶輕度粘連，未見(jiàn)硬化腎小球;腎小管擴(kuò)張，可見(jiàn)蛋白管型，輕度散在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，病變較模型組減輕。黃芪高、低組、解毒高、低組和阿托伐他汀他汀組系膜基質(zhì)中-重度增生，部分區(qū)域有硬化

7、現(xiàn)象，小管上皮細(xì)胞空泡變性，散在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，較模型組減輕，但效果不及糖腎高、低組。黃芪高、低組、解毒高、低組的系膜區(qū)增生、小球硬化較阿托伐他汀組減輕。
　　(6)免疫組化:正常組腎小球和腎間質(zhì)內(nèi)幾乎檢測(cè)不到iNOS（M1型巨噬細(xì)胞）和CD163（M2型巨噬細(xì)胞）。模型組腎小球、腎間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大量的M1型巨噬細(xì)胞，少許的M2型巨噬細(xì)胞。阿托伐他汀組、糖腎高、低組、解毒高、低組、黃芪高、低組腎組織內(nèi)的M1型巨噬細(xì)胞較模型組減少，M2型

8、巨噬細(xì)胞增多(P＜0.05)。糖腎高、低組M1型巨噬細(xì)胞較阿托伐他汀組減少，M2型巨噬細(xì)胞較其增加。黃芪高、低組、解毒高、低組內(nèi)的M1、M2型巨噬細(xì)胞與阿托伐他汀組相似，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　(7)Western Blot結(jié)果:正常組腎組織蛋白內(nèi)幾乎檢測(cè)不到iNOS、TNF-α蛋白和少量的CD163蛋白。模型組檢測(cè)到大量的iNOS、TNF-α和少許的CD163。糖腎高、低組、解毒高、低組、黃芪高、低組、阿托伐他汀組提

9、取出的蛋白均存在iNOS、TNF-α和CD163，且iNOS、TNF-α表達(dá)量較模型組減少，CD163的表達(dá)較模型組增多(P＜0.01)。糖腎高、低組、黃芪高組、解毒高組iNOS蛋白、TNF-α較阿托伐他汀組減少(P＜0.05);各中藥治療組的高劑量降低iNOS、TNF-α效果優(yōu)于低劑量組(P＜0.05)。糖腎高、低組內(nèi)的iNOS、TNF-α較黃芪組、解毒組均低(P＜0.05)。TNF-α的表達(dá)隨著iNOS的增多而增多，與iNOS的表達(dá)

10、呈正相關(guān)。糖腎高、低組、黃芪高、低組、解毒高、低組內(nèi)CD163的表達(dá)較阿托伐他汀組增多(P＜0.01)。糖腎高、低組內(nèi)的CD163較黃芪組、解毒組均增高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)M1、M2型巨噬細(xì)胞在DN大鼠模型中的數(shù)量均增加，尤以M1型增多更為明顯。M1型相關(guān)炎癥因子TNF-α的表達(dá)也隨M1型巨噬細(xì)胞的增多面增強(qiáng)。這種變化提示了不同表型的巨噬細(xì)胞均參與了DN的炎癥反應(yīng)。
　　(2)糖腎合劑可降低24小時(shí)尿蛋白、血

11、清肌酐、尿素氮、總膽固醇，升高血清白蛋白、減輕腎臟病理改變。糖腎合劑通過(guò)抑制M1型巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，下調(diào)TNF-α的表達(dá)，促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞的活化來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用。
　　(3)糖腎合劑組成中的黃芪、解毒利濕類(lèi)藥物對(duì)巨噬細(xì)胞的影響同糖腎合劑相似，但M1型的降低、M2型的增高程度均不如糖腎合劑。降低尿蛋白定量、升高白蛋白效果也不及糖腎合劑。單獨(dú)使用黃芪、解毒利濕類(lèi)中藥治療時(shí)，未能明顯改善腎功能。解毒利濕類(lèi)中藥可以降低血清