腎消通絡(luò)方對(duì)糖尿病腎病的防治作用及作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:觀察腎消通絡(luò)方對(duì)糖尿病腎病大鼠的防治作用，以TGF-β1/Smad信號(hào)通路為核心研究腎消通絡(luò)方的作用機(jī)制。
　　 方法:選用清潔級(jí)、雄性SD大鼠50只，體重200±20g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)選取10只為對(duì)照組(A組Controlgroup)，40只為造模組。采用1次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)方法制作糖尿病模型，72h后，尾靜脈取血測(cè)定造模組大鼠空腹血糖，高于16.7mmol/L者為成功糖尿病模型。對(duì)成功造模的大鼠進(jìn)行

2、完全隨機(jī)分組:模型組(B組Modelgroup)、厄貝沙坦組(C組Irbesartangroup)、中藥組(D組Shenxiaogroup)。次日起開(kāi)始灌服給藥，中藥按生藥20g/kg·d，厄貝沙坦按25mg/kg·d，模型組和對(duì)照組灌服等量蒸餾水，1次/天，給藥共12周，自由飲食。12周末，尾靜脈取血測(cè)定大鼠空腹血糖;使用代謝籠留取24h尿，測(cè)定尿微量白蛋白（mA1b）含量;腹腔注射10％水合氯醛麻醉動(dòng)物，腹主動(dòng)脈取血，離心，留取血清

3、標(biāo)本，-20℃保存，檢測(cè)血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG);左側(cè)腎組織，4％多聚甲醛溶液固定，行HE、PAS染色，觀察腎臟病理改變，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、血管細(xì)胞黏附分子(VCAM)的表達(dá);右側(cè)腎組織皮質(zhì)部切取1mm3組織固定于電鏡液，電鏡觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)改變;右側(cè)腎組織其余部分液氮保存，采用RT-PCR測(cè)定腎組織中TGF-β1mRNA的表達(dá)，采用Westernblo

4、t測(cè)定腎組織中Smad2/3、Smad7、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)、纖維粘連蛋白(FN)的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、腎消通絡(luò)方對(duì)DN大鼠血糖的影響
　　 對(duì)照組血糖處于正常范圍內(nèi)，模型組、厄貝沙坦組、中藥組血糖水平較對(duì)照組明顯升高（P＜0.05），中藥組血糖水平有下降趨勢(shì)，但較模型組、厄貝沙坦組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 2、腎消通絡(luò)方對(duì)DN大鼠24hmA1b的影響
　　

5、模型組、厄貝沙坦組、中藥組24hmA1b水平較對(duì)照組明顯升高（P＜0.05)，模型組較厄貝沙坦組、中藥組24hmA1b水平明顯升高（P＜0.05），厄貝沙坦組、中藥組之間24hmA1b水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 3、腎消通絡(luò)方對(duì)DN大鼠腎功能的影響
　　 模型組、厄貝沙坦組、中藥組Scr、BUN水平較對(duì)照組明顯升高(P＜0.05)，模型組較厄貝沙坦組、中藥組Scr、BUN水平明顯升高（P＜0.05），厄

6、貝沙坦組、中藥組之間Scr、BUN水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 4、腎消通絡(luò)方對(duì)DN大鼠腎血脂的影響
　　 模型組、厄貝沙坦組、中藥組TC水平較對(duì)照組明顯升高（P＜0.05），模型組較厄貝沙坦組、中藥組TC水平明顯升高（P＜0.05），厄貝沙坦組、中藥組之間TC水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組之間TG水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但中藥組TG水平有下降趨勢(shì)。
　　 5、腎組織病理

7、形態(tài)學(xué)觀察
　　 HE染色:對(duì)照組腎小球、腎小管形體結(jié)構(gòu)基本正常;模型組腎臟病理改變明顯，腎小球基底膜明顯增厚，細(xì)胞外基質(zhì)積聚，系膜細(xì)胞增生;厄貝沙坦組和中藥組較模型組病理改變減輕，兩組間差異不明顯。PAS染色:對(duì)照組腎小球形體結(jié)構(gòu)基本正常，PAS陽(yáng)性物質(zhì)無(wú)明顯增多;模型組腎臟病理改變明顯，系膜區(qū)PAS陽(yáng)性物質(zhì)增多，紅染明顯，腎小球基底膜明顯增厚，細(xì)胞外基質(zhì)積聚;厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕，PAS陽(yáng)性物質(zhì)較模型組有所

8、減少。電鏡觀察:對(duì)照組腎小球基底膜結(jié)構(gòu)基本正常，厚度均勻，足突結(jié)構(gòu)正常，足細(xì)胞無(wú)調(diào)亡、脫落;模型組腎小球基底膜廣泛增厚，部分節(jié)段明顯，大量足突融合和缺失，部分足細(xì)胞丟失;厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕，腎小球基底膜增厚不明顯，足突融合較少。
　　 6、腎消通絡(luò)方對(duì)DN大鼠腎臟VCAM、TGF-β1表達(dá)的影響
　　 對(duì)照組VCAM、TGF-β1在腎小球，腎小管處均有少量表達(dá);模型組、厄貝沙坦組、中藥組VCAM、TG

9、F-β1的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高，模型組在腎小球內(nèi)可見(jiàn)VCAM、TGF-β1大量表達(dá)，在內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞處均呈現(xiàn)表達(dá)增高，在細(xì)胞外基質(zhì)也有散在陽(yáng)性表達(dá);厄貝沙坦組和中藥組VCAM、TGF-β1的表達(dá)水平較模型組有所降低，部分腎小球出現(xiàn)表達(dá)增高，整體水平較模型組呈現(xiàn)下調(diào)，厄貝沙坦組和中藥組之間差異不明顯。
　　 7、腎消通絡(luò)方對(duì)DN大鼠腎臟TGF-β1mRNA表達(dá)的影響
　　 模型組、厄貝沙坦組、中藥組TGF-β1mR

10、NA水平較對(duì)照組明顯升高（P＜0.05），模型組較厄貝沙坦組、中藥組TGF-β1mRNA水平明顯升高（P＜0.05），厄貝沙坦組、中藥組之間TGF-β1mRNA水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 8、腎消通絡(luò)方對(duì)DN大鼠腎臟Smad2/3、Smad7、CTGF、FN表達(dá)的影響
　　 模型組Smad2/3水平較對(duì)照組、厄貝沙坦組、中藥組明顯升高(P＜0.05)，對(duì)照組、厄貝沙坦組、中藥組之間Smad2/3水平差異

11、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。厄貝沙坦組、中藥組Smad7水平較對(duì)照組、模型組明顯升高(P＜0.05)，中藥組Smad7水平較厄貝沙坦組明顯升高（P＜0.05），對(duì)照組、模型組之間Smad7水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。模型組、厄貝沙坦組、中藥組CTGF、FN水平較對(duì)照組明顯升高（P＜0.05），模型組、中藥組CTGF、FN水平較厄貝沙坦組明顯升高（P＜0.05），模型組CTGF、FN水平較中藥組明顯升高（P＜0.05）。

12、>　　 結(jié)論:
　　 1、腎消通絡(luò)方可以減少24hmA1b，降低Scr、BUN水平，具有保護(hù)腎功能的作用。
　　 2、腎消通絡(luò)方可使TC水平降低，血糖、TG水平呈下降趨勢(shì)。
　　 3、腎消通絡(luò)方能夠減輕腎臟病理?yè)p傷，對(duì)腎臟組織具有保護(hù)作用。
　　 4、腎消通絡(luò)方能夠下調(diào)腎臟TGF-β1mRNA及TGF-β1的水平，降低Smad2/3的水平，提高Smad7的水平，對(duì)TGF-β1/Smad信號(hào)通路的抑制作用