下頜前移矯治器對OSAHS兔頦舌肌NF–κB和TNF–α、IL–6的影響.pdf

1、目的：本研究擬通過建立新西蘭大白兔OSAHS模型及其下頜前移矯治器（MAD）的治療，研究OSAHS以及MAD治療對頦舌肌組織（GG）中NF–κB P65及炎癥細(xì)胞因子TNF–α和IL–6的影響。探討OSAHS對GG損害的可能炎性機(jī)制，為OSAHS導(dǎo)致GG損害的發(fā)病機(jī)理研究以及MAD治療OSAHS對GG影響的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.動物分組：純種雄性新西蘭大白兔18只，6月齡，體重3.0kg~3.5kg。

2、隨機(jī)分為3組，每組6只，分別是:1)阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征組（Group OSAHS）;2)下頜前移矯治器組（Group MAD）和3)正常對照組（control group）。
　　2.動物模型的建立：造模前將三組實驗動物置于仰臥位，進(jìn)行上氣道螺旋CT掃描（美國LightspeedGE16層型螺旋CT機(jī)）和多導(dǎo)睡眠監(jiān)測（美國邦德Monet型多導(dǎo)睡眠監(jiān)測系統(tǒng)），以排除先天性O(shè)SAHS或解剖性上氣道狹窄。1％戊巴比妥鈉對OS

3、AHS組和MAD組動物行全身麻醉后，在距軟硬腭交界1.5cm處的軟腭黏膜下肌層注射聚丙烯酰胺水凝膠混合物2ml。注射完成后，應(yīng)用以上同樣方法拍攝上氣道螺旋 CT并進(jìn)行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測，以確定OSAHS動物模型建立成功。OSAHS動物模型建立成功后，MAD組的OSAHS兔適應(yīng)3天后佩戴下頜前移矯治器（MAD）。MAD由自凝牙托粉和牙托水制作而成，用玻璃離子粘結(jié)劑粘固于上前牙。當(dāng)MAD戴入兔口內(nèi)后，其前斜面與上頜平面成60°角，導(dǎo)下頜前移3mm

4、~4mm，咬合打開2mm~3mm。建模完成后，應(yīng)用以上同樣方法拍攝上氣道螺旋CT并進(jìn)行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測，以評估MAD的療效。
　　3.仰臥位睡眠:建模完成后第4天，檢查實驗動物注射傷口，無破潰、無感染，進(jìn)食、進(jìn)水無異常。接下來的8周，每日上午按5ml/kg~6ml/kg的劑量對三組實驗動物經(jīng)口腔灌注10%水合氯醛，使其仰臥位睡眠2小時~4小時。其余時間正常進(jìn)食﹑進(jìn)水﹑自由活動。
　　4.標(biāo)本的采集及處理:8周后，術(shù)前24小時禁食

5、禁水，經(jīng)耳緣靜脈以2ml/kg的劑量注射1%戊巴比妥鈉，對動物行全身麻醉。將兔置于仰臥位并固定四肢，打開口腔后將舌抬起，逐層分離舌下筋膜、肌肉暴露頦舌肌，將頦舌肌的兩端固定后小心離斷，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗表面血液，將每只兔的頦舌肌組織剪成大小、體積相似的兩塊，液氮速凍，–80℃凍存。
　　5.頦舌?。℅G）細(xì)胞核中NF–κB P65蛋白的表達(dá)量測定:按照核蛋白提取試劑盒說明書抽提三組動物GG中的核蛋白，然后用BCA法測定核蛋白的蛋

6、白濃度，確定蛋白上樣量。蛋白質(zhì)免疫印跡分析法（Western Blot）測定NF–κB P65蛋白相對于細(xì)胞核內(nèi)參蛋白—組蛋白3（Histone3, H3）的表達(dá)量。
　　6.頦舌?。℅G）中炎癥細(xì)胞因子TNF–α和IL–6的濃度測定:按照兔腫瘤壞死因子α（TNF–α）和兔白細(xì)胞介素6（IL–6）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書測定三組動物GG中的TNF–α和IL–6在波長為450nm下的吸光度值，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出炎癥

7、細(xì)胞因子TNF–α和IL–6的濃度。
　　7.相關(guān)性分析:將三組動物GG中NF–κB P65蛋白相對表達(dá)量與TNF–α和IL–6的濃度以及AHI、SaO2進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　1.動物的一般情況：建模3天后，各組動物均能正常飲水、進(jìn)食、自由活動。三組動物在建模前、建模2周以及建模8周后的體重?zé)o明顯差異。它們在仰臥位睡眠時，OSAHS組鼾聲明顯且不均勻，睡眠過程中易驚醒；MAD組部分呼吸音較重或輕微打鼾，基本

8、平穩(wěn)；正常對照組呼吸均勻，狀態(tài)平穩(wěn)。
　　2.上氣道螺旋CT結(jié)果：OSAHS組與MAD組、對照組比較，軟腭1/4點﹑1/2點和3/4點處上氣道矢狀向間隙及上氣道橫截面積均明顯減小，差異有顯著性；而MAD組較對照組上述指標(biāo)雖然減小，但差異無顯著性。
　　3.多導(dǎo)睡眠監(jiān)測記錄：OSAHS組動物與MAD組、對照組相比，呼吸暫停低通氣指數(shù)升高、血氧飽和度下降、睡眠效率減低，差異有顯著性；MAD組較對照組以上指標(biāo)的變化無顯著性差異。<

9、br>　　4.頦舌?。℅G）細(xì)胞核中NF–κB P65蛋白相對表達(dá)量：OSAHS組、MAD組和正常對照組的NF–κB P65蛋白相對表達(dá)量分別為0.44±0.08、0.30±0.09、0.24±0.07。OSAHS組較MAD組、對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；MAD組與對照組相比升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.頦舌?。℅G）中TNF–α和IL–6的濃度：OSAHS組、MAD組和正常對照組的TNF–α濃度分別為96.80±18.0

10、0pg/ml、71.16±20.18pg/ml、64.80±19.51pg/ml。OSAHS組較MAD組、對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；MAD組與對照組相比升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義。OSAHS組、MAD組和正常對照組的 IL–6濃度分別為93.30±16.97pg/ml、69.25±14.28pg/ml、63.49±13.15pg/ml。OSAHS組較MAD組、對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；MAD組與對照組相比升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義。

11、
　　6.GG細(xì)胞核中NF–κB P65與TNF–α和IL–6相關(guān)性分析：NF–κB P65與TNF–α和IL–6濃度呈明顯正相關(guān)，r值分別0.886、0.862，P值均為0.000。
　　7.GG中NF–κB P65與AHI和SaO2相關(guān)性分析：NF–κB P65與AHI成正相關(guān)，r值為0.722，P值為0.000；NF–κB P65與SaO2成負(fù)相關(guān)，r值為–0.685，P值為0.000。
　　結(jié)論：
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