雌激素對頦舌肌功能的影響及其相關(guān)作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（Obstructivesleepapneahyponeasyndrome,OSAHS）是以睡眠期間上氣道發(fā)生反復(fù)阻塞為特征的呼吸紊亂現(xiàn)象。由于睡眠期間通氣不足，血氧濃度降低，患者易出現(xiàn)嗜睡、頭昏、焦慮、抑郁，進(jìn)而出現(xiàn)高血壓、腦血栓等心腦血管疾病，最終可導(dǎo)致患者死亡。OSAHS的發(fā)病機(jī)理主要可以歸結(jié)為上氣道解剖性狹窄與上氣道擴(kuò)張肌功能異常兩個(gè)方面。流行病學(xué)調(diào)查研究顯示，OSAHS男性的發(fā)病

2、率明顯高于女性，男、女之間的比例約為2-3:1。然而，臨床研究表明，女性絕經(jīng)后OSAHS發(fā)病率顯著上升，但在使用雌激素替代治療后其發(fā)病率降低，同時(shí)，頦舌肌的肌電活性也明顯增強(qiáng)。這些研究結(jié)果提示雌激素對OSAHS的發(fā)病起到了重要的保護(hù)作用，但具體機(jī)制尚不明確。因此，本課題擬在以往研究的基礎(chǔ)上，通過建立不同雌激素水平的動物模型和頦舌肌原代培養(yǎng)細(xì)胞模型，從體內(nèi)和體外兩方面研究雌激素對頦舌肌生物學(xué)功能的影響并探討可能的分子機(jī)制。從而為OSAHS

3、的臨床預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　(1)采用卵巢切除與雌激素替代法建立不同雌激素水平的動物模型，通過頦舌肌電生理檢測觀察雌激素對頦舌肌功能的影響，并采用免疫組織化學(xué)方法檢測大鼠頦舌肌雌激素受體的表達(dá)。
　　(2)通過機(jī)械分離加酶消化法進(jìn)行大鼠頦舌肌原代培養(yǎng)，采用差速貼壁法純化細(xì)胞，并使用免疫熒光方法對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　(3)采用細(xì)胞免疫熒光方法鑒定雌激素受體α（ER-α）與β（ER-β）在頦舌

4、肌成肌細(xì)胞上的表達(dá)與分布。
　　(4)使用激光共聚焦顯微鏡動態(tài)觀測雌激素對頦舌肌成肌細(xì)胞Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。
　　(5)通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測雌激素對頦舌肌成肌細(xì)胞肌球蛋白重鏈各亞型mRNA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)雌激素對大鼠頦舌肌功能存在顯著影響，隨血清雌激素水平的升高，頦舌肌肌電活性增強(qiáng)。
　　(2)免疫組化染色結(jié)果顯示ER-α與ER-β在大鼠頦舌肌組織中呈弱陽性表達(dá)，二者的表達(dá)強(qiáng)度在

5、各實(shí)驗(yàn)組間無明顯差異。
　　(3)細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示，α-橫紋肌肌動蛋白、骨骼肌特異性肌球蛋白染色均為陽性，且陽染細(xì)胞數(shù)大于95％，說明原代培養(yǎng)的大鼠頦舌肌成肌細(xì)胞純度高，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
　　(4)細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示，ER-α、ER-β在大鼠頦舌肌成肌細(xì)胞胞核與胞漿中均有表達(dá)。ER-α在胞核與胞漿中的表達(dá)均較強(qiáng)，ER-β主要表達(dá)在胞漿中，在胞核中的表達(dá)較弱。
　　(5)激光共聚焦顯微鏡動態(tài)觀測結(jié)果顯示，正

6、常條件下雌激素對頦舌肌成肌細(xì)胞胞漿內(nèi)Ca2+濃度沒有明顯影響。但在酸性條件下雌激素能夠降低頦舌肌成肌細(xì)胞胞漿Ca2+濃度，減少鈣離子在細(xì)胞內(nèi)的蓄積。
　　(6)熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示，雌激素能夠明顯上調(diào)MHCImRNA的表達(dá)，下調(diào)MHCIIbmRNA的表達(dá)。對MHCIIa和IIxmRNA的表達(dá)無明顯作用。
　　結(jié)論：
　　(1)采用雙側(cè)卵巢切除與雌激素替代法建立了不同雌激素水平的大鼠動物模型，頦舌肌電生理檢測證實(shí)

7、雌激素可以影響大鼠頦舌肌的功能。
　　(2)成功培養(yǎng)了大鼠頦舌肌成肌細(xì)胞，并且細(xì)胞純度高，可作為體外相關(guān)生物學(xué)研究的細(xì)胞模型。
　　(3)頦舌肌中存在雌激素受體α、β的陽性表達(dá)，并進(jìn)一步在細(xì)胞水平明確兩種雌激素受體在胞漿與胞核中的分布與定位。
　　(4)在酸性環(huán)境下，雌激素可能通過調(diào)控頦舌肌成肌細(xì)胞胞漿內(nèi)鈣離子濃度影響頦舌肌的功能。
　　(5)雌激素可能通過調(diào)節(jié)頦舌肌成肌細(xì)胞肌球蛋白重鏈各亞型mRNA的表達(dá)來影響