下頜前移矯治對OSAHS兔血漿NO及肺小動脈的影響.pdf

1、目的：通過建立阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome，OSAHS)新西蘭兔模型，研究OSAHS對兔血漿NO(nitric oxide， NO)及肺小動脈的影響，探討下頜前移矯治器(Mandibular advancement device，MAD)治療OSAHS后二者的改變，為臨床治療OSAHS及預防其可能引發(fā)的肺小動脈改變提供實驗基礎和理論依據。
　　

2、 方法：將30只雄性6月齡體重3～3.5kg新西蘭兔隨機分為三組，分別為OSAHS組、MAD組和對照組。OSAHS組和MAD組實驗動物均行1％戊巴比妥鈉全身麻醉。于軟腭中間距軟硬腭交界0.5cm處，粘膜下肌層注射聚丙烯酰胺水凝膠1～2ml，直至動物出現響亮鼾聲及呼吸暫停時停止。仰臥位頭顱側位片顯示注射后軟腭后緣1/4點、1/2點、3/4點處上氣道寬度較對照組明顯狹窄，動脈血氣分析發(fā)現注射后動物睡眠發(fā)生呼吸暫停時血氧飽和度較對照組降低了2

3、2％。以上說明OSAHS動物模型建立成功。MAD組配帶下頜前移矯治器引導下頜向前。
　　 MAD組佩戴矯治器兩天后，三組動物以5～6ml/kg的劑量經口灌注10％水合氯醛催眠動物，使之仰臥位睡眠，4～6小時/天，持續(xù)8周。首次睡眠過程中分別對三組動物上氣道間隙再次進行測量。同時，在睡眠呼吸暫停發(fā)生時分別抽取三組動物的耳緣動脈血1ml進行血氧飽和度、氧分壓、二氧化碳分壓和pH值測定。
　　 8周后，1％戊巴比妥鈉麻醉狀態(tài)下

4、自耳緣靜脈取血2ml，肝素抗凝，立即離心10分鐘(4℃，3000r/min)，分離并收集血漿，用硝酸還原酶法測量血漿中NO的含量。
　　 在同一麻醉狀態(tài)下，開胸取出肺組織后3.3mol/L中性甲醛緩沖液灌注固定肺組織10分鐘，結扎氣管后放于同種固定液中48小時以上。沿肺門水平橫斷取材，梯度酒精順序脫水，二甲苯透明后石蠟包埋，切片，HE常規(guī)染色及EVG(Elastic Van Gieson，EVG)彈力纖維染色，Nikon ECL

5、IPSE80i顯微鏡觀察肺小動脈(直徑≤150pm)的變化，應用Motic Digilab version1.2自動圖像分析系統(tǒng)對肌性肺動脈相對中膜厚度(percentage wall thickness， WT％)及肺微動脈百分比進行測定。同時，取下腭咽部凝膠注射部位組織，固定于中性甲醛緩沖液中，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色，觀察其組織學結構。
　　 實驗數據應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分別進行統(tǒng)計分析，以α＜0.05作為顯著

6、性檢驗水準。
　　 結果：
　　 1.一般情況：OSAHS組鼾聲響亮，不均勻，睡眠過程中伴數次驚醒及肢體癥狀；MAD組呼吸聲音稍粗重，較平穩(wěn)；正常組睡眠過程中呼吸均勻、平穩(wěn)、有規(guī)律。
　　 2.仰臥位上氣道寬度分析：OSAHS組軟腭1/4點、1/2點和3/4點的上氣道間隙分別為2.66±1.04mm、2.26±0.79mm、2.29±0.73mm，明顯小于MAD組和對照組，有顯著性差異(P＜0.05)；而MAD組

7、較對照組減小但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3.血氣分析：OSAHS組血氧飽和度、動脈氧分壓和pH值分別為69.43±1.66％、72.40±2.53mmHg、7.25±0.13，較MAD組、對照組顯著降低，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。二氧化碳分壓為53.32±2.57mmHg，明顯高于MAD組、對照組，差別有顯著性(P＜0.05)。MAD組和對照組以上各項均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 4.注射部

8、位組織學觀察：大體觀察軟腭中間后緣處有白色隆起，外有一層薄而透明的包膜包裹，界限清楚，質地較韌且富有彈性。光鏡下觀察凝膠被染成藍紫色，成交聯(lián)狀，表面有一層由彈性纖維和膠原纖維形成的膜包繞，與周圍組織界限清楚，沒有炎癥反應及向周圍組織擴散的現象。
　　 5.血漿中NO的測定：OSAHS組、MAD組及對照組的NO含量分別為52.28±0.38μmol/L、65.16±0.53μmol/L、66.17±0.60pmol/L。OSAHS

9、組NO含量明顯低于MAD組和對照組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);MAD組低于對照組，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 6.肺小動脈組織學觀察：
　　 6.1 肌性肺動脈(40μm≤d≤150pm)的組織學觀察：HE染色鏡下觀察OSAHS組管壁增厚，管腔狹窄，呈現肺血管重建的現象；MAD組動脈管壁輕微增厚；對照組肌性肺動脈管壁較薄，管腔較大。EVG彈力纖維染色鏡下觀察發(fā)現OSAHS組中膜明顯增厚；MAD組中膜略有增

10、厚，但與對照組相比變化并不明顯；對照組中膜很薄。
　　 6.2 肺微動脈(d≤40μm)的組織學觀察：HE染色較難辨別三組間差別。EVG彈力纖維染色鏡下觀察發(fā)現OSAHS組出現較多的肌性動脈，即肺微動脈有內外兩層彈力膜，其間有平滑肌細胞環(huán)繞；MAD組大部分肺微動脈僅有一層彈力膜包繞，類似于對照組。
　　 7.肌性肺動脈相對中膜厚度的測定：OSAHS組、MAD組及對照組的WT％分別為13.07±0.56％、9.05±0.3

11、6％、8.62±0.46％。OSAHS組WT％顯著高于MAD組及對照組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);MAD組WT％較對照組略有增大，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 8.肺微動脈百分比的測定：OSAHS組、MAD組及對照組肌性動脈和部分肌性動脈占肺微動脈的百分比分別為22.56％、8.75％、7.64％。OSAHS組明顯高于MAD組及對照組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);MAD組及對照組間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。<