FoxM1驅(qū)動ADAM17-EGFR作用環(huán)路促進(jìn)膠質(zhì)瘤間質(zhì)轉(zhuǎn)化.pdf

1、目的：本研究旨在探索FoxM1/ADAM17對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用，探明FoxM1/ADAM17/EGFR作用環(huán)路的活化機(jī)制，為腦膠質(zhì)瘤的臨床診斷、治療提供新的策略。
　　方法：（1）應(yīng)用熒光定量PCR、Western blotting和免疫熒光分別檢測4種人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中FoxM1、ADAM17、間質(zhì)表型標(biāo)志物（FN、N-ca、vimentin、YKL-40）、上皮表型標(biāo)志物E-ca的mRNA、蛋白表達(dá)水平；（2）應(yīng)用

2、CCK8（Cell Counting Kit-8）法、平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)分別評價(jià)細(xì)胞增殖能力、克隆形成能力；（3）應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、成骨誘導(dǎo)和成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)分別檢測細(xì)胞的遷移能力、成骨、成脂分化潛能，評價(jià)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化能力；（4）應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因、點(diǎn)突變技術(shù)、染色質(zhì)免疫共沉淀法（ChIP）探明FoxM1對ADAM17表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制；（5）用Western blotting、基因轉(zhuǎn)染等手段分析Fo

3、xM1/ADAM17/EGFR作用環(huán)路中上下游分子的變化，探明FoxM1調(diào)控膠質(zhì)瘤間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：（1）SW1783和LN229細(xì)胞中FoxM1、ADAM17表達(dá)水平低于U251MG和U87MG細(xì)胞，間質(zhì)表型標(biāo)志物表達(dá)水平也明顯低于U251MG和U87MG細(xì)胞，間質(zhì)表型標(biāo)志物表達(dá)水平與FoxM1/ADAM17的表達(dá)水平呈正相關(guān)；（2）在SW1783和LN229中分別過表達(dá)FoxM1或ADAM17，可使細(xì)胞相對增殖率

4、、克隆形成能力、遷移率、成骨和成脂分化潛能增強(qiáng)，細(xì)胞上皮表型標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)水平降低，間質(zhì)表型標(biāo)志物表達(dá)水平明顯升高；而在U251MG和U87MG中分別下調(diào)FoxM1或ADAM17的表達(dá)，細(xì)胞增殖率、克隆形成能力、遷移率、成骨和成脂分化潛能降低，細(xì)胞上皮表型標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)水平升高，間質(zhì)表型標(biāo)志物表達(dá)水平明顯下降；(3)在SW1783中過表達(dá)FoxM1，ADAM17的mRNA、蛋白表達(dá)水平均顯著升高，而在U8

5、7MG中下調(diào)FoxM1的表達(dá)，ADAM17的mRNA、蛋白表達(dá)水平均顯著降低，且過表達(dá)FoxM1可增強(qiáng)ADAM17啟動子所介導(dǎo)的熒光素酶活性，突變所預(yù)測的FoxM1-ADAM17啟動子結(jié)合位點(diǎn)-1190至-1183、-1136至1129、-968至-961以后， ADAM17啟動子所介導(dǎo)的熒光素酶活性均顯著減弱。過表達(dá)FoxM1同時(shí)下調(diào)ADAM17的表達(dá)，F(xiàn)oxM1促進(jìn)膠質(zhì)瘤間質(zhì)轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象可被下調(diào)的ADAM17所抑制；而下調(diào)FoxM1表

6、達(dá)的同時(shí)過表達(dá)ADAM17，下調(diào)FoxM1表達(dá)所引起的抑制膠質(zhì)瘤間質(zhì)轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象可被過表達(dá)的ADAM17所挽救；（4）在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，F(xiàn)oxM1通過ADAM17激活了EGFR/AKT通路，從而磷酸化GSK3β（S9）；（5）ADAM17通過EGFR/AKT通路磷酸化GSK-3β（S9）使其失活，從而維持了FoxM1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的穩(wěn)定性。
　　結(jié)論：（1）FoxM1/ADAM17途徑促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長；（2）FoxM1通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控A