TRAP1在Il-24促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡中作用的研究.pdf

1、目的：研究IL-24對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷作用。通過對轉(zhuǎn)染IL-24前、后的U251細(xì)胞內(nèi)TRAP1蛋白表達(dá)的檢測，探討TRAP1在IL-24促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞線粒體凋亡途徑中的作用，為闡明IL-24作為治療因子對膠質(zhì)瘤的免疫治療機(jī)制，提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：1、培養(yǎng)U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞，查找人IL-24目的基因序列，選取合適質(zhì)粒載體pCDNA3.1+，合成目的基因、構(gòu)建質(zhì)粒，連接目的基因和質(zhì)粒，并測序、擴(kuò)增。
　　2、脂質(zhì)

2、體Lipofectamine2000包裹pcDNA3.1(+)-IL-24，轉(zhuǎn)染至U251細(xì)胞內(nèi)。
　　3、RT-PCR檢測各組U251細(xì)胞內(nèi)IL-24mRNA的表達(dá)情況。
　　4、Western-blot分別檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞24h、48h、72hTRAP1蛋白的表達(dá)。
　　5、流式技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染組和對照組U251細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：1.RT-PCR檢測結(jié)果顯示，pcDNA3.1(+)-IL-24組IL-24

3、mRNA表達(dá)水平明顯高于空載質(zhì)粒組和空白組(P<0.05)；空載質(zhì)粒組與空白組IL-24mRNA水平未見明顯差別(P>0.05)。
　　2.Western-blot檢測結(jié)果顯示，pcDNA3.1(+)-IL-24轉(zhuǎn)染U251在24h、48h、72h后，細(xì)胞內(nèi)TRAP1蛋白表達(dá)逐漸降低(P<0.05)；24h，pcDNA3.1(+)-IL-24組較空白組和空質(zhì)粒組TRAP表達(dá)略升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而48h、72h時(shí)

4、較空白組和空質(zhì)粒組降低(P<0.05)；空白組與空質(zhì)粒組比較TRAP1蛋白的表達(dá)無差異(P>0.05)。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡顯示，在24h、48h、72h，pcDNA3.1(+)-IL-24組凋亡率呈逐漸增高(P<0.05)，其中48h、72h凋亡率較空白組及空載質(zhì)粒組增高(P<0.05)?？瞻捉M和空載質(zhì)粒組凋亡率無明顯差異(P>0.05)。
　　4.用partial相關(guān)分析轉(zhuǎn)染24h、48h、72h后，膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋