CMG2對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力的促進(jìn)作用及其機(jī)制.pdf

1、背景和目的:
　　膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。盡管近年來其治療方法有了長足的進(jìn)步，但其療效仍不盡人意。高度侵襲性是導(dǎo)致病人預(yù)后差的重要原因之一。因此，深入研究膠質(zhì)瘤侵襲的分子機(jī)制，對(duì)于發(fā)展有效的膠質(zhì)瘤治療新策略具有重要意義。
　　毛細(xì)血管形態(tài)發(fā)生基因(Capillary morphogenesis gene2，cmg2)因其在血管形成過程顯著上調(diào)表達(dá)而被發(fā)現(xiàn)，因其編碼的蛋白能介導(dǎo)炭疽桿菌毒素進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，故又稱其為炭疽

2、毒素受體2(Anthrax Toxin Receptor2，ANTXR2)，并被證明是炭疽桿菌毒素親和力最強(qiáng)的受體。業(yè)已闡明CMG2突變會(huì)導(dǎo)致幼年透明性纖維瘤病(Juvenile Hyaline Fibromatosis)。但CMG2確切的生理功能尚不十分清楚。近年來，已有關(guān)于CMG2與腫瘤關(guān)系的報(bào)道，CMG2高表達(dá)能促進(jìn)前列腺癌的轉(zhuǎn)移。正常腦組織中不表達(dá)CMG2，至今也無CMG2與膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究報(bào)道，但本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)CMG2在

3、膠質(zhì)瘤中顯著高表達(dá)，并與腫瘤級(jí)別呈正相關(guān)而與病人預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。鑒于侵襲性是膠質(zhì)瘤最顯著的惡性生物學(xué)行為之一，本課題研究的目的在于探索CMG2在膠質(zhì)瘤侵襲中的作用及可能的的分子機(jī)制，從而有望加深對(duì)膠質(zhì)瘤侵襲機(jī)制的認(rèn)識(shí)，也可能為膠質(zhì)瘤的預(yù)后判斷提供新的指標(biāo)并為臨床治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法:
　　1.利用慢病毒方法，構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)CMG2的膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87OE和091214OE以及穩(wěn)定敲低CMG2表達(dá)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87-sh2

4、。
　　2.Matrigel-transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察過表達(dá)/敲低CMG2細(xì)胞侵襲能力的差異，劃痕實(shí)驗(yàn)觀察其遷移能力的改變。
　　3.建立小鼠原位移植瘤模型，觀察過表達(dá)CMG2與否的膠質(zhì)瘤細(xì)胞在體內(nèi)的侵襲能力的差異以及對(duì)小鼠生存期的影響。
　　4.細(xì)胞免疫熒光方法用于觀察不同CMG2表達(dá)狀態(tài)膠質(zhì)瘤細(xì)胞絲狀偽足和層狀偽足的差異。
　　5.Western Blot檢測(cè)比較CMG2過表達(dá)與否的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中YAP及

5、p-YAP的表達(dá)水平。
　　6.免疫組織化學(xué)方法分析72例不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤病人腫瘤組織中YAP的表達(dá)特征，采用Kaplan-Meier法和LogRank檢驗(yàn)分析YAP在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與病人預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.CMG2促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移能力
　　(1)體外Matrigel-transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)顯示:與對(duì)照組相比較，過表達(dá)CMG2增強(qiáng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移能力(p＜0.05)，而

6、敲低CMG2則降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力(p＜0.05)。
　　(2)小鼠體內(nèi)原位移植瘤實(shí)驗(yàn)顯示:與對(duì)照組相比較，種植了過表達(dá)CMG2的膠質(zhì)瘤細(xì)胞的小鼠腫瘤組織前沿具明顯侵襲現(xiàn)象，小鼠生存期縮短(p＜0.05);種植CMG2下調(diào)表達(dá)細(xì)胞的小鼠生存期延長(p＜0.05)。
　　2.CMG2促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞層狀偽足和絲狀偽足的形成
　　細(xì)胞免疫熒光染色分析發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組相比較，過表達(dá)CMG2的膠質(zhì)瘤細(xì)胞能形成更多的層狀偽足和絲

7、狀偽足。
　　3.CMG2上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中YAP的表達(dá)
　　Western Blot檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn):伴隨過表達(dá)CMG2的膠質(zhì)瘤細(xì)胞偽足形成增多，Hippo通路的關(guān)鍵效應(yīng)蛋白YAP的表達(dá)上調(diào)。
　　4.膠質(zhì)瘤組織中YAP的表達(dá)與腫瘤級(jí)別呈正相關(guān)而與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)
　　(1)免疫組織化學(xué)分析顯示:YAP在高級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)高于低級(jí)別(p＜0.05)。
　　(2)生存分析顯示:YAP高表達(dá)的膠質(zhì)瘤病人預(yù)后不良(