補中益氣湯預防給藥對UC小鼠NLRP3炎性體調控研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分：補中益氣湯預防給藥對UC小鼠腸道變化的影響
　　目的：
　　UC是以腹痛、腹瀉、黏液血便為主要臨床表現的潰瘍性結腸炎疾病。建立小鼠UC模型，以補中益氣湯行預防性給藥，觀察小鼠全身癥狀的變化，結腸病理改變，評估補中益氣湯對急慢性UC小鼠的預防作用。
　　方法:
　　將240只C57BL/6小鼠隨機分為空白對照組、模型對照組、柳氮磺砒啶(SASP)對照組，補中益氣

2、湯高劑量組，補中益氣湯中劑量組，補中益氣湯低劑量組，每組40只。除正常組外，其余各組予DSS造模7天?？瞻讓φ战M，模型對照組每日給予蒸餾水0.01mL/g灌胃;柳氮磺砒啶對照組每日給予柳氮磺砒啶1.33g/kg灌胃;補中益氣湯高、中、低劑量組每日分別給予補中益氣丸12g/kg、6g/kg、3g/kg灌胃，給藥周期14天，于1、2、3、4周4個時間點處死部分小鼠（每組10只），提取結腸樣本，觀察小鼠結腸病理變化。
　　結果:

3、　　較空白組，各周模型組小鼠結腸縮短(P＜0.05)，結腸質量增加(P＜0.05);較模型組，各周用藥組結腸縮短明顯緩解(P＜0.05)，結腸質量無明顯差異。各周模型組小鼠病理見結腸上皮糜爛，出血，多病灶淺潰瘍，大量炎細胞浸潤;給藥組均不同程度的改善上述癥狀。
　　第二部分：補中益氣湯預防給藥對UC小鼠結腸黏膜NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA的影響
　　目的：
　　NLRP3炎性體由NLRP3(NOD樣

4、受體3，NOD-like receptor protein3)、ASC（凋亡相關的斑點樣蛋白，apoptosis-associated speck-like protein containing CARD)、caspase-1（含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1）構成。NLRP3是危險信號的感受器，能被多種病原體激活，激活后的NLRP3可與ASC、caspase-1連接，形成NLRP3炎性體，從而進一步使caspase-1活化，參與腸道免疫

5、反應。本實驗通過觀察補中益氣湯對UC小鼠行預防干預后小鼠黏膜NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA的影響，并探討相關機制。
　　方法:
　　造模、分組、給藥同前。處死小鼠，提取結腸樣本。采用實時熒光定量-聚合酶鏈式反應(real-time Quantitative polymerase chain reaction，qPCR)檢測小鼠結腸黏膜NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表達水平。
　　結果

6、:
　　造模1、2周時，較空白組，模型組NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表達水平顯著升高(P＜0.05);較模型組，柳氮磺砒啶對照組NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表達水平顯著下降(P＜0.05);補中益氣湯高、中、低劑量組NLRP3的mRNA表達水平無明顯差異，ASC、caspase-1的mRNA表達水平顯著下降(P＜0.05)。造模3、4周時，較空白對照組，模型對照組NLRP3、ASC、casp

7、ase-1的mRNA表達水平顯著升高(P＜0.05);較模型對照組，柳氮磺砒啶對照組、補中益氣湯高、中、低劑量組NLRP3的mRNA表達水平下降(P＜0.05)，ASC、caspase-1的mRNA表達水平顯著升高（P＜0.05）。
　　第三部分：補中益氣湯預防給藥對UC小鼠結腸黏膜及血漿細胞因子IL-1β、IL-18、IL-33的作用
　　目的：
　　活化后的NLRP3炎性體可激活caspase-1，使其分泌加工IL

8、-1β、IL-18、IL-33等細胞因子。IL-1β、IL-18、IL-33是重要的炎癥介質，在潰瘍性結腸炎的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。
　　方法:
　　造模、分組、給藥同前。提取小鼠血漿樣本及結腸黏膜樣本。采用酶聯免疫吸附測定法檢測小鼠血漿及結腸黏膜中IL-1β、IL-18、IL-33的含量。
　　結果:
　　與空白對照組比較，各周模型對照組小鼠血漿、結腸黏膜中IL-1β、IL-18、IL-33的含量顯著升高(

9、P＜0.05);造模1周時，與模型組比較，柳氮磺砒啶對照組、補中益氣湯高、中、低劑量組小鼠血漿、結腸黏膜IL-1β、IL-18、IL-33的含量顯著降低(P＜0.05);造模2周時，與模型對照組比較，柳氮磺砒啶對照組、補中益氣湯高、中、低劑量組小鼠血漿、結腸黏膜IL-1β、IL-18含量顯著降低(P＜0.05)，IL-33的含量無明顯差異(P＞0.05);造模3、4周時，與模型對照組比較，柳氮磺砒啶對照組、補中益氣湯高、中、低劑量組小鼠

10、血漿、結腸黏膜IL-1β、IL-18、IL-33的含量無明顯差異(P＞0.05)。
　　結論:研究結果顯示，葡聚糖硫酸鈉可成功誘導小鼠急慢性潰瘍性結腸炎，模型對照組在潰瘍性結腸炎急性、慢性期均顯示出與人類潰瘍性結腸炎相似的癥狀，其炎癥的發(fā)展可能與小鼠結腸黏膜NLRP3炎性體被激活，小鼠結腸黏膜NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表達上調，以及其下游炎癥因子IL-1β、IL-18、IL-33的表達上調相關。本研究以柳氮磺