羧甲基-β-1,3-葡聚糖對X射線和12C6+重離子束輻射的防護(hù)作用研究.pdf

1、目的：檢測分析羧甲基-β-1,3-葡聚糖(CMG)對 HMy細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用和對細(xì)胞增殖的影響；利用多靶單擊模型，對進(jìn)行X射線和12C6+重離子束照射后的細(xì)胞克隆存活進(jìn)行存活曲線的擬合，并且分析比較羧甲基-β-1,3-葡聚糖對HMy細(xì)胞放射生物學(xué)參數(shù)的影響；探究羧甲基-β-1,3-葡聚糖對 HMy細(xì)胞遭受電離輻射后的細(xì)胞凋亡、活性氧類、線粒體膜電位、脂質(zhì)氧化反應(yīng)產(chǎn)物丙二醛、超氧化物歧化酶活性、DNA損傷程度和 DNA損傷修復(fù)能力等的影

2、響，進(jìn)而檢測、評價羧甲基-β-1,3-葡聚糖對 X射線和12C6+重離子束輻照的防護(hù)作用，并且探討羧甲基-β-1,3-葡聚糖可能的輻射防護(hù)作用機(jī)理。
　　材料與方法：通過 CCK-8法探究不同濃度羧甲基-β-1,3-葡聚糖，在不同孵育時間下對HMy細(xì)胞增殖的影響，并篩選出藥物的最佳作用濃度和孵育時間，并且作為后續(xù)實驗的細(xì)胞預(yù)處理條件。用不同劑量的X射線和12C6+重離子束分別輻照藥物預(yù)處理和未進(jìn)行藥物預(yù)處理的HMy細(xì)胞，用軟瓊脂克

3、隆形成試驗檢測細(xì)胞存活率，并對存活率進(jìn)行多靶單擊擬合，分析放射生物學(xué)參數(shù)的變化；通過流式細(xì)胞術(shù)對細(xì)胞凋亡、活性氧和線粒體膜電位的改變進(jìn)行定量分析；利用丙二醛檢測試劑盒對脂質(zhì)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物丙二醛的生成量進(jìn)行檢測；利用超氧化物歧化酶活性測定試劑盒對超氧化物歧化酶活性的變化進(jìn)行測定；通過微核實驗探究微核率的變化情況；利用堿性單細(xì)胞凝膠電泳實驗研究 DNA損傷和修復(fù)的變化情況。
　　結(jié)果：羧甲基-β-1,3-葡聚糖對 HMy細(xì)胞沒有細(xì)胞毒

4、性作用，并且有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用；通過多靶單擊擬合得到的相關(guān)放射生物學(xué)參數(shù)的變化可以看出，羧甲基-β-1,3-葡聚糖能夠提升 HMy細(xì)胞的輻射抗性，降低細(xì)胞放射敏感性，并且能夠提升細(xì)胞損傷修復(fù)的能力；對于輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、活性氧和線粒體膜電位的改變均有緩解作用，對電離輻射造成的超氧化物歧化酶活性的降低有恢復(fù)作用，并且能夠抑制細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)氧化反應(yīng)產(chǎn)物丙二醛含量的增加；羧甲基-β-1,3-葡聚糖能夠降低輻射造成的細(xì)胞微核的產(chǎn)生，降低彗星尾長

5、和尾部 DNA含量。
　　結(jié)論：（1）羧甲基-β-1,3-葡聚糖是一種安全低毒高效的輻射防護(hù)藥物，對X射線和12C6+重離子束，兩種分別為低 LET和高 LET的電離輻射造成的損傷都能起到很好的防護(hù)作用。（2）羧甲基-β-1,3-葡聚糖對輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激反應(yīng)都有抑制作用，表現(xiàn)出抗氧化活性，減輕了電離輻射引起的HMy細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)。（3）羧甲基-β-1,3-葡聚糖對輻射造成的遺傳毒性有恢復(fù)作用，增加了 HMy細(xì)胞 D