(1,3)-β-D葡聚糖的檢測(cè)方法學(xué)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、人體血清中(1,3)-β-D葡聚糖（βG）的含量測(cè)定是臨床上侵襲性真菌感染的檢測(cè)指標(biāo)。本文克隆了能與βG特異性結(jié)合的美洲鱟屬G因子α亞基片段a基因（Gαa），代替了天然珍惜鱟血，不用擔(dān)心資源的枯竭和原料的穩(wěn)定性。分子量為1251bp，選擇pET-15b為表達(dá)載體，構(gòu)建了工程菌BL21-pET-15b-Gαa。原核表達(dá)并純化了Gαa蛋白，質(zhì)量為43kDa，通過(guò)鎳柱純化后，純度達(dá)到95％以上，濃度為2mg/mL。
　　利用了Gαa蛋白

2、與βG特異性結(jié)合的特性，探究檢測(cè)βG含量的3種方法：酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法、比濁檢測(cè)方法和碳量子點(diǎn)熒光生物檢測(cè)方法。
　　模擬雙抗夾心法，可以檢測(cè)到βG濃度下限為20ng/mL，建立了酶聯(lián)免疫檢測(cè)的方法。
　　在紫外分光光度計(jì)340nm下檢測(cè)其吸光度與加入βG含量呈正線性相關(guān)，線性范圍3.125-200μg/mL，R2=0.997，檢測(cè)限為3.125μg/mL，建立了比濁檢測(cè)方法。
　　利用Gαa蛋白可以和氨基化修飾碳量子點(diǎn)

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