神經(jīng)管畸形鼠中葉酸干預(yù)與H3K27me3表達(dá)關(guān)系的研究.pdf

1、目的:以全反式維甲酸（All-trans Retinoic Acid, ATRA)誘導(dǎo)構(gòu)建的神經(jīng)管畸形鼠模型為研究對象，探索在神經(jīng)管畸形(Neural Tube Defects, NTDs)的發(fā)生發(fā)展過程中H3K27me3（H3組蛋白第27位賴氨酸的三甲基化狀態(tài)）和其下游葉酸代謝相關(guān)基因Adcy2的表達(dá)變化情況，了解葉酸干預(yù)在這一過程中的影響作用，探討在神經(jīng)管畸形的發(fā)生過程中葉酸干預(yù)的預(yù)防作用，為防治神經(jīng)管畸形(Neural Tube

2、Defects, NTDs)的早期發(fā)生提供可靠的理論依據(jù)。
　　方法:1.動物模型的建立：把24只健康且性成熟的雌性SD大鼠分為隨機(jī)三組；1.1.胎鼠大體形態(tài)學(xué)觀察：于E15d時剖宮取胎，觀察胎鼠的形態(tài)學(xué)特征，記錄各個類型胎鼠數(shù)量，統(tǒng)計(jì)并分析畸形胎鼠發(fā)生率。1.2.胎鼠神經(jīng)管電鏡下觀察：剝離出各組胎鼠神經(jīng)管，經(jīng)過電鏡包埋后置于透射電子顯微鏡下觀察并拍照。1.3.病理學(xué)觀察：取各組胎鼠組織進(jìn)行HE染色，并在顯微鏡下觀察其病理學(xué)變化。

3、
　　2.各組胎鼠神經(jīng)管中H3K27me3表達(dá)量的檢測：采用免疫組織化學(xué)染色法和Western blot技術(shù)檢測三組胎鼠中的H3K27me3的表達(dá)，并對其進(jìn)行定性、定量分析。
　　3.各組胎鼠神經(jīng)管中基因 Acdy2表達(dá)量的測定：采用QRT-PCR技術(shù)對各組胎鼠中Adcy2基因的表達(dá)量進(jìn)行測定分析。
　　結(jié)果:1.動物模型制作及觀察結(jié)果：1.1.統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析顯示正常組未發(fā)現(xiàn)畸形胎鼠，實(shí)驗(yàn)組的神經(jīng)管畸形發(fā)生率為84％，葉

4、酸干預(yù)組的畸形發(fā)生率為41.1%；實(shí)驗(yàn)組畸形發(fā)生率和正常組比較明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），葉酸干預(yù)組比正常組畸形率增加，但與實(shí)驗(yàn)組比較其畸形率顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　1.2.各組神經(jīng)管電鏡下觀察結(jié)果：正常組神經(jīng)管組織，其細(xì)胞核完整，呈圓形或卵圓形。線粒體清晰可見；實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)管組織細(xì)胞核不完整，變形嚴(yán)重，線粒體出現(xiàn)皺縮，甚至溶解；葉酸干預(yù)組神經(jīng)管細(xì)胞核雖然也存在變形、皺縮現(xiàn)象，但與實(shí)驗(yàn)組

5、比較，其狀況有相應(yīng)的改善，細(xì)胞間隙趨于正常，少部分線粒體出現(xiàn)皺縮、溶解。
　　1.3.HE染色結(jié)果：正常組胎鼠可看到其神經(jīng)管發(fā)育正常，脊髓形態(tài)正常。實(shí)驗(yàn)組中顯性脊柱裂的胎鼠，其脊髓改變復(fù)雜，脊柱背側(cè)覆皮中斷不連續(xù)，脊髓結(jié)構(gòu)破壞紊亂，脊髓伴隨脊膜向外膨出，多伴有炎性細(xì)胞侵襲。葉酸干預(yù)組中脊柱裂較少，無尾畸形較多，相比實(shí)驗(yàn)組而言葉酸干預(yù)組發(fā)育有所改善，但比正常組發(fā)育仍然較差。
　　2.各組神經(jīng)管中H3K27me3表達(dá)量的檢測：免

6、疫組化結(jié)果顯示：正常組中H3K27me3的表達(dá)量低，實(shí)驗(yàn)組中為強(qiáng)陽性表達(dá)，葉酸干預(yù)組中其表達(dá)量稍低于實(shí)驗(yàn)組，但并沒有顯示出差異性，而與正常組相比較，差異較明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Western blot檢測結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組中H3K27me3的表達(dá)量高于正常組和葉酸干預(yù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），葉酸干預(yù)組表達(dá)量介于兩組之間，差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.各組神經(jīng)管中Adcy2基因的QR