兩種海洋抗氧化肽預(yù)防UVB致小鼠皮膚癌的效應(yīng)及可能機理研究.pdf

1、目的：建立模擬日光紫外線B（180mJ/cm2）長期照射昆明種無毛小鼠皮膚癌的模型，從AQP3，AQP9，EGFR，AKT的分子角度，研究扇貝多肽（PCF）和狹鱈魚皮膠原蛋白肽（CPWPS）對UVB輻射誘導(dǎo)致皮膚癌的預(yù)防作用。
　　方法： CCK-8法檢測不同濃度（50，100，200，300，500，1000，2000mg·L-1）的CPWPS對HaCaT細(xì)胞的毒性，篩選其對HacaT細(xì)胞的無毒性作用劑量，將PCF和CPWPS無

2、毒性劑量作用于表皮鱗癌細(xì)胞A431，同法檢測細(xì)胞存活率。動物實驗分組：正常對照組、模型組、5％VC組，5%PCF組，5%CPWPS組，20%CPWPS組。除正常對照組外其他各組均進(jìn)行180mJ/cm2 UVB誘導(dǎo)，每個周照射3次共照射25周，建立皮膚癌的模型；肉眼觀察，HE染色法探究5，10，15，20，25周的昆明種無毛小鼠的皮膚病理改變。采用免疫組化的方法檢測25周時模型組和正常組PCNA的表達(dá)量及各組AQP3，AQP9，EGFR，

3、P-AKT的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：細(xì)胞水平：CPWPS濃度高于300mg·L-1時對HaCaT細(xì)胞有毒性作用(P<0.05)。選取50,100,200mg·L-1的CPWPS和1.42，2.48，5.68mmol·L-1的PCF作用于表皮鱗癌A431細(xì)胞時，并未抑制細(xì)胞增殖（P>0.05)，無統(tǒng)計學(xué)意義。動物水平：肉眼觀察到隨著持續(xù)的UVB照射，模型組第5周無毛鼠的皮膚出現(xiàn)紅斑，長鱗屑，第10周，脫屑，掉毛，第15周開始出現(xiàn)帽針

4、尖大小丘疹，第20周丘疹進(jìn)一步增多，第25周形成腫瘤；同時期5%PCF組，20%CPWPS組較模型組均有不同程度的癥狀減輕。海洋抗氧化肽3組出現(xiàn)腫瘤的時間均比陽性對照組晚，且25周時平均每只老鼠背部腫瘤個數(shù)較VC組少，尤其是20%CPWPS組平均每只無毛鼠背部僅出現(xiàn)1.80±0.45個腫瘤（P<0.05)。HE的光鏡結(jié)果顯示，正常組昆明種無毛小鼠皮膚組織表皮層較有毛小鼠薄，毛囊及汗腺較有毛小鼠少，其他均無不同。UVB照射5周后，模型組無

5、毛小鼠皮膚表皮層較非UVB照射組變厚；照射10周后，表皮角化過度，表皮突不規(guī)則輕度向下延伸；照射15周后，角化過度更加明顯，開始出現(xiàn)癌巢；照射20周后，角化過度相對15周進(jìn)一步明顯，癌巢增多，黑色素輕微沉積，核漿比增大，突破基底層浸潤，細(xì)胞排列較亂，異型性；照射25周后，高度的角化過度，彌漫的異型性細(xì)胞，癌巢進(jìn)一步增多且明顯，部分伴有鱗癌角珠。免疫組化結(jié)果顯示模型組的PCNA蛋白表達(dá)量明顯高于正常組（P<0.05)，綜合以上結(jié)果顯示無毛

6、鼠皮膚癌模型構(gòu)建成功。而同時期各給藥組較模型組均有不同程度的癥狀減輕。與正常組相比，模型組AQP3,AQP9,EGFR,P-AKT蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05)；與模型組相比，5%PCF組，5%CPWPS組，20%CPWPS組，5%VC各給藥組中AQP3，AQP9，EGFR，P-AKT蛋白表達(dá)水平均降低（P<0.05)，且20%CPWPS組各蛋白表達(dá)水平均降低的最為顯著（P<0.05)。
　　結(jié)論：新發(fā)現(xiàn)AQP9與EGFR,