血漿microRNAs預(yù)測氯吡格雷抗血小板療效及心血管不良事件的研究.pdf

1、目的：
　　血漿中存在穩(wěn)定的并可以反映血小板被激活情況的特異性microRNAs，具備作為冠心病等疾病的生物標(biāo)記物潛能。我們前期研究也發(fā)現(xiàn)，血漿miR-126可能是潛在的預(yù)測經(jīng)皮冠狀動脈介入治療PCI術(shù)后冠心病患者心臟主要不良事件的生物標(biāo)記物。本課題旨在通過對氯吡格雷藥動學(xué)/藥效學(xué)實驗尋找與氯吡格雷藥物效應(yīng)有關(guān)的miRN As，用 miRNAs對PCI術(shù)后冠心病患者服用氯吡格雷后在隨訪期內(nèi)，發(fā)生主要不良心血管事件 MACE的風(fēng)險率

2、和次要終點(diǎn)出血事件發(fā)生率進(jìn)行預(yù)測評估，探討血漿循環(huán)miRN As是否可以作為評估氯吡格雷抗血小板療效個體差異的生物標(biāo)記物。
　　方法：
　?。?）篩選與氯吡格雷藥效有關(guān)的miRN As：首先設(shè)計系列預(yù)實驗來建立、優(yōu)化血漿miRNA提取和定量檢測的方法；入選診斷為冠心病的患者153例，服用氯吡格雷首劑300 mg負(fù)荷劑量以及阿司匹林100mg后，用VerifyNow抗血小板治療監(jiān)測系統(tǒng)檢測血小板集聚率 AR U、P R U，根

3、據(jù)檢測結(jié)果分組并組成血漿樣本池，提取血漿總RNA；運(yùn)用 illumina高通量測序檢測并篩選在組間差異表達(dá)的miRN As；然后基于特異性莖環(huán)引物 qRT-PCR方法，驗證和篩選的這些 miRNAs在樣本池間的表達(dá)；同時也通過 qRT-PCR方法在每個單獨(dú)患者血漿樣本間檢測篩選到的miRNAs表達(dá)水平，用Spearman相關(guān)分析方法統(tǒng)計血漿循環(huán) miRNAs與氯吡格雷藥效學(xué)（血小板聚集率PRU）的相關(guān)性；
　?。?）用所篩選miR

4、NAs預(yù)測氯吡格雷藥動學(xué)效應(yīng)：入選另一診斷為冠心病的人群31例，服用氯吡格雷首劑300 mg負(fù)荷劑量以及阿司匹林100mg，進(jìn)行氯吡格雷藥代動力學(xué)考察以及服藥前血漿miRN As檢測，分析miRN As表達(dá)水平與氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物MP-H4藥代動力學(xué)PK參數(shù)（Cmax、AUC0-4h、Tmax）的相關(guān)性與預(yù)測性；
　?。?）在前瞻性隊列驗證miRNAs與心血管不良事件的影響：入選診斷為冠心病，并且服用氯吡格雷聯(lián)合阿司匹林抗血小板

5、治療的患者1230例，作為獨(dú)立的前瞻性研究隊列，進(jìn)行為期三年的隨訪調(diào)查，同時采集患者入院后服藥前的血漿，檢測所篩選到的miRNAs的表達(dá)水平，運(yùn)用Cox回歸或Logistic回歸模型分析臨床基線特征資料和血漿 miRN As表達(dá)水平分別與患者隨訪期內(nèi)發(fā)生主要終點(diǎn) M AC E事件和次要終點(diǎn)出血事件風(fēng)險的關(guān)系，篩選能夠預(yù)測氯吡格雷抗血小板療效個體差異的中間指標(biāo)。
　　結(jié)果：
　?。?）本實驗建立和優(yōu)化的對血漿miRN As定量

6、分析的qRT-PCR方法有效可行。通過illumina建庫測序檢測篩選到17個在組間差異表達(dá)的miRNAs。其中，在血漿樣本池間驗證得到與測序結(jié)果相一致的有6個miRNAs（miR-126、miR-130a、miR-27a、miR-106a、miR-21、miR-142）。并且，這6個血漿 miRNAs中 miR-126、miR-130a、miR-27a、miR-142在氯吡格雷抵抗人群中表達(dá)上調(diào)（P<0.05）。在發(fā)生阿司匹林抵抗時，

7、miR-126、miR-130a、miR-142、miR-21和 miR-27 a在氯吡格雷抗抵抗人群中表達(dá)顯著升高（P<0.05）。
　?。?）在氯吡格雷藥代動力學(xué)研究中，運(yùn)用錯誤控制方法FDR對P值進(jìn)行多重檢驗校正后發(fā)現(xiàn)，患者服藥前血漿miR-142的表達(dá)水平與MP-H4 Cmax和AUC0-4h顯著負(fù)性相關(guān)（P<0.05）。
　?。?）在前瞻性隊列研究中，較高的miR-142和 miR-126的表達(dá)水平與該患者接受氯吡

8、格雷抗血小板治療后 M AC E事件高發(fā)生率顯著相關(guān)（P值分別為0.0006、0.0353）。多因素 Cox回歸分析顯示，血漿 miR-142表達(dá)水平、合并疾病糖尿病、心衰以及使用鈣離子通道拮抗劑是患者在氯吡格雷用藥后隨訪期內(nèi)發(fā)生 MACE風(fēng)險率的獨(dú)立影響因素（P值均<0.05）。另外，血漿miR-21、miR-27a、miR-106a、miR-126、miR-130a和miR-142的表達(dá)水平，與患者服用氯吡格雷后在隨訪期內(nèi)發(fā)生或不發(fā)

9、生出血事件無明顯關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)論：
　　血漿miR-126、miR-130a、miR-142、miR-21和miR-27a可能是反映氯吡格雷抗血小板藥物效應(yīng)的潛在中間指標(biāo)。在 PCI術(shù)后服用氯吡格雷的冠心病患者中，血漿miR-142表達(dá)水平與糖尿病、心衰和合并使用鈣離子通道阻滯劑都是引起MAC E的獨(dú)立風(fēng)險因素?；趯iR-142與氯吡格雷藥動/藥效學(xué)的相關(guān)研究證明，血漿miR-142可以作為評估其抗血小板藥物效應(yīng)個體差