EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因表達(dá)檢測與分析.pdf

1、[目的]前期課題組通過基因芯片檢測篩選出EBV誘發(fā)淋巴瘤的3個(gè)候選關(guān)鍵分子，分別是TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因。本課題采用熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞和正常人淋巴細(xì)胞中TOP2A、PBK、HIST2H2BE差異表達(dá)情況，驗(yàn)證前期課題組基因芯片結(jié)果，為EB病毒誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和淋巴瘤發(fā)生的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　[方法]采集7例健康獻(xiàn)血員外周靜脈血并從中分離出正常人淋巴細(xì)

2、胞，用EBV體外誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，構(gòu)建轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞模型。提取EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及配對的正常人淋巴細(xì)胞的總RNA及蛋白，應(yīng)用Western blot和熒光定量PCR方法，檢測TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因在7例EBV體外轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞及配對的健康成人正常淋巴細(xì)胞中的表達(dá)。
　　[結(jié)果]本實(shí)驗(yàn)成功建立了7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系，并檢測了TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因在7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及配

3、對的正常人淋巴細(xì)胞中的表達(dá)情況。TOP2A基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞TOP2A的mRNA與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)上調(diào)1.413倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Western blot結(jié)果顯示，TOP2A在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)上調(diào)2.760倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PBK基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞中PBK的mRNA與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)上調(diào)1.422倍，差異具有

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Western blot結(jié)果顯示，PBK在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)上調(diào)3.047倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HIST2H2BE基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞中HIST2H2BE的mRNA與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)上調(diào)1.757倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Western blot結(jié)果顯示，HIST2H2BE在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)上調(diào)2.003倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。