EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中CXCR4,c-FOS，F(xiàn)YN，PTPN11基因表達(dá)檢測(cè)與分析.pdf

1、[目的]前期課題組篩選出EBV誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的4個(gè)關(guān)鍵分子，分別是CXCR4，c-FOS，F(xiàn)YN，PTPN11基因。本課題通過熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)正常人淋巴細(xì)胞和體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中CXCR4，c-FOS，F(xiàn)YN，PTPN11差異表達(dá)情況，驗(yàn)證前期課題組基因芯片結(jié)果，為EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　[方法]采集7例健康獻(xiàn)血員外周靜脈血并從中分離出正常人淋巴細(xì)胞，用EBV體外誘

2、導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，構(gòu)建永生化的淋巴母細(xì)胞模型。提取EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及配對(duì)的正常人淋巴細(xì)胞的蛋白及RNA，應(yīng)用Western blot和熒光定量PCR方法，檢測(cè)CXCR4，c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV體外轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞及配對(duì)的健康成人正常淋巴細(xì)胞中的表達(dá)。
　　[結(jié)果]本實(shí)驗(yàn)成功建立了7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系，并檢測(cè)了CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及配對(duì)的正

3、常人淋巴細(xì)胞中的表達(dá)情況。CXCR4基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞CXCR4的mRNA與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)下調(diào)2.718倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Western blot結(jié)果顯示，CXCR4在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)下調(diào)1.894倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。c-FOS基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞中c-FOS的mRNA與正常人淋巴細(xì)胞相

4、比，表達(dá)下調(diào)2.641倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Western blot結(jié)果顯示，c-FOS在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)下調(diào)2.323倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。FYN基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞中FYN的mRNA與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)下調(diào)2.451倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Western blot結(jié)果顯示，F(xiàn)YN在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相

5、比，表達(dá)下調(diào)2.019倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。PTPN11基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞PTPN11的mRNA與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)上調(diào)2.057倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Western Blot結(jié)果顯示，PTPN11在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比，表達(dá)上調(diào)2.127倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　[結(jié)論]1. CXCR4在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中的蛋白表達(dá)