效應(yīng)性T細(xì)胞活性及AngⅡ水平與T2DM合并頸動(dòng)脈狹窄的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分 Th1、Th2和Th17與兔頸動(dòng)脈粥樣硬化形成的相關(guān)性研究
　　目的：探討建立一個(gè)適合實(shí)驗(yàn)研究的頸動(dòng)脈粥樣硬化狹窄（carotid atherosclerotic stenosis，CASS）動(dòng)物模型的方法，為下一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)；通過檢測(cè)斑塊中Th1、Th2和Th17的標(biāo)志物的表達(dá)，探討它們?cè)贑ASS發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法：日本大耳白兔40只，在頸總動(dòng)脈上采用氣體干燥損傷血管內(nèi)膜的方法制造特定條件的損傷(1

2、60ml/min×15min)，然后以高脂飼料喂養(yǎng)動(dòng)物不同時(shí)間(30天，60天和90天)建立CASS模型。通過B超、血脂測(cè)定、DSA、HE染色方法評(píng)價(jià)各組動(dòng)物血管狹窄程度,觀察其病理改變特點(diǎn)。按上述方法制成CASS兔30只兔，正常兔普通飼料喂養(yǎng)10只作為對(duì)照組，在麻醉下分離頸總動(dòng)脈后灌注固定取材。應(yīng)用免疫組化方法觀察Th1、Th2和Th17的表達(dá)因子IFN-γ、IL-4和IL-17的變化，評(píng)價(jià)各組動(dòng)物AS斑塊中IFN-γ、IL-4和IL

3、-17細(xì)胞因子表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　(1)平均狹窄率為：30天組：26.59％±4.81%；60天組：49.12%±2.96%；90天組：71.53%±3.65%，建模成功率達(dá)到80%。病理檢查證實(shí)：隨著高脂飼料喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，AS狹窄程度在加重，90天組標(biāo)本的AS病理改變屬于成熟期AS表現(xiàn)（粥樣斑塊期）。
　　(2)IFN-γ和IL-17的表達(dá)在正常血管內(nèi)中膜中無明顯表達(dá), IL-4無表達(dá)；與正常組相比，實(shí)驗(yàn)組

4、IFN-γ和IL-17呈強(qiáng)陽性表達(dá)，IL-4仍呈弱陽性表達(dá)； IFN-γ在實(shí)驗(yàn)組60天和90天較30天組表達(dá)明顯增多（P<0.05）；IL-4在30天、60天、90天表達(dá)無變化；IL-17隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)逐漸增高（P<0.05）。
　　結(jié)論：用干燥氣體損傷加高脂飼料喂養(yǎng)家兔的方法能成功建立CASS模型,建模后的狹窄程度和病理改變符合CASS實(shí)驗(yàn)研究需要；Th1和Th17在AS中的激活與AS病變的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，起到促進(jìn)作

5、用；而Th2細(xì)胞對(duì)AS形成無明顯作用。
　　第二部分 Th1、Th2、Th17、 Ang II水平與2型糖尿病患者形成頸動(dòng)脈狹窄的關(guān)系
　　目的：探討Th1、Th2、Th17和Ang II水平在T2DM合并頸動(dòng)脈狹窄患者中的關(guān)系；
　　方法：在我院（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院）于2014年9月至2015年6月，選擇T2DM合并頸動(dòng)脈狹窄患者（CA組）30例，2型糖尿病患者（T2DM組）20例和健康體檢者10例。收集患者的臨

6、床資料。同時(shí)，分離的外周血單核細(xì)胞用來檢測(cè)Th1、Th2和Th17細(xì)胞比例；其轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3和RORγt和其特征因子IFN-γ、IL-4和IL-17用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)；Ang II水平用放射免疫測(cè)定方法檢測(cè)。
　　結(jié)果：CA組Ang II表達(dá)明顯高于T2DM組和對(duì)照組(P<0.05)。Th1和 Th17陽性細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子 T-bet和 RORγt以及其表達(dá)因子IFN-γ和IL-17在CA組明顯高于T2DM組和對(duì)照組(

7、P<0.05)。
　　結(jié)論：T2DM合并頸 AS患者外周血效應(yīng)性 T細(xì)胞活性發(fā)生顯著變化；Th1和 Th17細(xì)胞可能促進(jìn)了 T2DM患者形成頸動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展；Th2對(duì)其形成和發(fā)展無作用；血漿中高AngII水平在T2DM致頸AS進(jìn)程中起到積極地推動(dòng)作用
　　第三部分 Ang II對(duì)Th1、Th2、Th17活性的影響
　　目的：研究效應(yīng)性T細(xì)胞及其相關(guān)表達(dá)因子在Ang II刺激劑和Ang II拮抗劑作用下表達(dá)的關(guān)

8、系；
　　方法：選擇10例健康體檢者，分離外周血單核細(xì)胞之后應(yīng)用ELISA和RT-PCR分別檢測(cè)效應(yīng)性T細(xì)胞及其相關(guān)因子，加用Ang II刺激劑和Ang II拮抗劑后觀察T細(xì)胞的變化。
　　結(jié)果：健康體檢者的外周血細(xì)胞在Ang II刺激劑作用下，效應(yīng)性T細(xì)胞活性和Th1、Th2和Th17的特征因子IFN-γ、IL-4和IL-17以及轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3和RORγt的表達(dá)明顯增多(P<0.05)，而在Ang II拮抗