亞低溫對(duì)顱腦創(chuàng)傷后 necroptosis的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究necroptosis新的細(xì)胞死亡方式在顱腦創(chuàng)傷（TBI）后的發(fā)生發(fā)展情況，以及探索亞低溫干預(yù)對(duì)其表達(dá)變化的影響。初步探討necroptosis在TBI組織病理發(fā)生發(fā)展中的潛在意義，為揭示亞低溫治療在TBI后發(fā)揮腦保護(hù)作用的潛在機(jī)制提供新層次的分子學(xué)基礎(chǔ)。
　　方法：構(gòu)建成年雄性SD大鼠（210-260 g）液壓顱腦創(chuàng)傷模型，按傷后6h、24h和72h不同時(shí)段取損傷側(cè)大腦皮層和海馬組織，通過熒光定量 PCR和Wester

2、n-blot檢測(cè)necroptosis的關(guān)鍵調(diào)控分子RIP3和MLKL在不同時(shí)間段mRNA和蛋白的表達(dá)變化；在完成打擊操作后30分鐘進(jìn)行亞低溫(33-35)或側(cè)腦室藥物注射處理。通過Western-blot和免疫組化染色等觀察亞低溫對(duì)TBI后6h傷側(cè)皮層和海馬腦組織RIP1、RIP3和MLKL蛋白表達(dá)變化，活體碘化丙啶染色檢測(cè)細(xì)胞壞死情況，HE染色檢測(cè)腦組織挫傷量等；通過Western-blot檢測(cè)注射對(duì)照試劑DMSO，以及nec-1、

3、GSK’872和NSA等壞死性凋亡靶向抑制劑對(duì)TBI后6h傷側(cè)皮層炎癥因子HMGB1、TNF-α、IL-6和IL-18表達(dá)情況。
　　結(jié)果：與SHAM組相比較，傷側(cè)皮層RIP1、RIP3和MLKL在TBI后6h明顯升高（p<0.05），而在24h和72h時(shí)間段則無(wú)明顯差異；海馬組織僅在TBI后6h的RIP1和 RIP3的免疫組織化學(xué)染色中出現(xiàn)明顯升高（p<0.05），在Western-blot檢測(cè)中壞死性凋亡的關(guān)鍵蛋白表達(dá)均未見明

4、顯差異；在使用亞低溫處理后，傷側(cè)皮層RIP1、RIP3和MLKL以及傷側(cè)海馬RIP1、RIP3表達(dá)均明顯降低；TBI組PI陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)較SHAM組明顯增多（p<0.01），在HT處理后顯著下降（p<0.01）；TBI后亞低溫組較常溫組腦組織挫傷量顯著減少（p<0.01）；挫傷側(cè)皮層組織HMGB1、TNF-α、IL-6和IL-18等炎癥因子表達(dá)在TBI后6小時(shí)均較SHAM組出現(xiàn)不同程度升高,并均可被亞低溫及GSK’872顯著抑制；此外，