嚴(yán)重創(chuàng)傷性失血性休克后亞低溫治療對(duì)大鼠免疫功能的影響.pdf

1、嚴(yán)重創(chuàng)傷(AIS＞3)感染發(fā)生率較高，是導(dǎo)致創(chuàng)傷病人死亡的第二位死因。嚴(yán)重創(chuàng)傷患者存在免疫功能紊亂，發(fā)生感染后單純抗感染療效差。T淋巴細(xì)胞亞群是具有特殊標(biāo)志的從胸腺中輸出的細(xì)胞，執(zhí)行細(xì)胞免疫效應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)功能，其中CD4+和CD8+是一對(duì)相互制約的T細(xì)胞亞群，細(xì)胞免疫的自我穩(wěn)定依賴于這對(duì)亞群間的平衡。IL-2主要由T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，在免疫應(yīng)答及調(diào)節(jié)中占有重要地位。腫瘤壞死因子TNF-α具有廣泛的生物學(xué)活性，可參與炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答。創(chuàng)傷后

2、TNF-α水平明顯升高，如失控性釋放，可引起炎癥反應(yīng)“級(jí)聯(lián)效應(yīng)”導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)，是多器官功能障礙綜合征(MODS)的發(fā)病基礎(chǔ)。免疫球蛋白是具有抗體活性的球蛋白，在體液免疫抗感染方面具有極其重要的作用。隨著對(duì)亞低溫認(rèn)識(shí)的加深以及其技術(shù)的進(jìn)步，越來越多的實(shí)驗(yàn)及臨床研究報(bào)告肯定了亞低溫的腦保護(hù)效果。對(duì)創(chuàng)傷性失血?jiǎng)游锖筒∪藢?shí)施有目的的全身降溫，可降低代謝率，減輕組織損傷，抑制炎癥反應(yīng)，延長創(chuàng)傷患者、尤其是大量失血患者急救的

3、“黃金時(shí)間”，提高存活率。目前，亞低溫對(duì)嚴(yán)重創(chuàng)傷后機(jī)體免疫功能影響的研究甚少。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠創(chuàng)傷性失血性休克模型，初步探討亞低溫治療對(duì)嚴(yán)重創(chuàng)傷后機(jī)體免疫功能的影響，為研究亞低溫對(duì)嚴(yán)重創(chuàng)傷后機(jī)體的保護(hù)機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 方法： 62只SD大鼠(體重200～280g，雌雄不限)，隨機(jī)分為3組，實(shí)驗(yàn)中因創(chuàng)傷、失血、低溫等因素死亡12只，剩余50只。(1)對(duì)照組：大鼠不予創(chuàng)傷和失血(n=10)；(2)正常體溫組：制作創(chuàng)傷性失血

4、性休克模型+正常體溫，分別與6h、24h兩個(gè)時(shí)相點(diǎn)檢測指標(biāo)(n=20)；(3)亞低溫組：制作創(chuàng)傷性失血性休克模型+亞低溫，分別與6h、24h兩個(gè)時(shí)相點(diǎn)檢測指標(biāo)(n=20)。除(1)組外，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以3％戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔麻醉，雙股骨中段閉合性骨折后，股動(dòng)脈插管放血至血壓40mmHg制成創(chuàng)傷性失血性休克模型。維持1h后，回輸全部失血及2倍量林格液。測定距肛門2cm直腸內(nèi)溫度。正常體溫組用烤燈照射，維持大鼠直腸溫度于38～39℃，持

5、續(xù)3h；亞低溫組用冰水降溫，維持大鼠直腸溫度于32.5～33.5℃，持續(xù)3h。于創(chuàng)傷性失血性休克模型完成后6h，24h于腹主動(dòng)脈抽血，取1.6ml血漿，用于T細(xì)胞亞群的測定(FCM法)。取4ml血漿離心，取上清液于-20℃冰箱中保存，用于外周血免疫球蛋白IgG等的測定(ELISA法)。取脾并培養(yǎng)脾淋巴細(xì)胞，按照試劑盒的要求，用雙抗體夾心ELISA法測定經(jīng)ConA刺激脾淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-2、TNF-α。并觀察各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的死亡情

6、況。 結(jié)果： 1.在創(chuàng)傷性失血性休克后，外周血中CD4+明顯降低(P＜0.01)，CD8+升高(P＜0.05)，CD4+/CD8+明顯降低(P＜0.01)。創(chuàng)傷后亞低溫組與正常體溫組相比，6h組無顯著性差異(P＞0.05)；24h組外周血中CD4+升高(P＜0.05)，CD8+下降(P＜0.05)，CD4+/CD8+升高(P＜0.01)。 2.創(chuàng)傷性失血性休克后，經(jīng)ConA刺激脾淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-2降低

7、(P＜0.01)，TNF-α升高(P＜0.01)。創(chuàng)傷后亞低溫組與正常體溫組相比細(xì)胞因子IL-2升高(P＜0.05)，TNF-α降低(P＜0.01)。 3.與正常對(duì)照組比較，大鼠創(chuàng)傷性失血性休克后外周血免疫球蛋白IgG無顯著性差異(P＞0.05)。創(chuàng)傷后亞低溫組與正常體溫組相比，外周血免疫球蛋白IgG無顯著性差異(P＞0.05)。 4.實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)照組無動(dòng)物死亡，亞低溫組與正常體溫組動(dòng)物均有動(dòng)物死亡，死亡率有所差別，但無

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.創(chuàng)傷性失血性休克后早期(24h內(nèi))模型大鼠存在細(xì)胞免疫功能抑制，表現(xiàn)為：外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD8+升高，CD4+、CD4+/CD8+明顯降低；經(jīng)ConA刺激脾淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-2明顯降低，而TNF-α明顯升高。應(yīng)用亞低溫治療后，T淋巴細(xì)胞亞群CD8+降低，CD4+、CD4+/CD8+升高；IL-2增加，TNF-α明顯下降，提示亞低溫可能改善嚴(yán)重創(chuàng)傷性失血性休克后機(jī)體早