大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核-伏隔核nesfatin-1通路構(gòu)成及胃功能調(diào)控研究.pdf

1、目的：
　　Nesfatin-1是新發(fā)現(xiàn)的一種能夠抑制攝食和胃運(yùn)動的新型腦腸肽類激素，廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道等外周器官?！帮柺持袠小毕虑鹉X腹內(nèi)側(cè)核是調(diào)控攝食的重要核團(tuán)；伏隔核參與獲取食物和進(jìn)食沖動的調(diào)控，兩個核團(tuán)中均有nesfatin-1的表達(dá)。目前下丘腦腹內(nèi)側(cè)核和伏隔核中nesfatin-1對攝食和胃酸分泌、胃運(yùn)動、胃排空等胃功能的調(diào)控作用仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)將研究集中于下丘腦腹內(nèi)側(cè)核和伏隔核：①觀察胃擴(kuò)張對下丘腦腹內(nèi)側(cè)核內(nèi)

2、nesfatin-1免疫陽性神經(jīng)元活性的影響；研究伏隔核→下丘腦腹內(nèi)側(cè)核nesfatin-1神經(jīng)通路的構(gòu)成；②探討nesfatin-1對下丘腦腹內(nèi)側(cè)核內(nèi)胃擴(kuò)張敏感神經(jīng)元電生理活性的影響，進(jìn)一步觀察伏隔核對下丘腦腹內(nèi)側(cè)核內(nèi)胃擴(kuò)張敏感神經(jīng)元的調(diào)控作用，闡明伏隔核→下丘腦腹內(nèi)側(cè)核nesfatin-1功能通路的構(gòu)成；③探討下丘腦腹內(nèi)側(cè)核nesfatin-1對攝食、胃酸分泌、胃運(yùn)動和胃排空的調(diào)控作用，以及伏隔核→下丘腦腹內(nèi)側(cè)核nesfatin-1

3、通路對腹內(nèi)側(cè)核功能的影響，補(bǔ)充和完善攝食和胃功能調(diào)控的中樞機(jī)制。
　　方法：
　　1.采用熒光免疫組織化學(xué)方法，觀察nesfatin-1在下丘腦腹內(nèi)側(cè)核表達(dá)及胃擴(kuò)張對nesfatin-1神經(jīng)元的激活作用；采用熒光金逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化技術(shù)，觀察伏隔核→下丘腦腹內(nèi)側(cè)核nesfatin-1神經(jīng)通路的構(gòu)成。
　　2.采用細(xì)胞表面微量注射藥物、腦核團(tuán)電刺激、神經(jīng)元胞外記錄等方法，觀察nesfatin-1、黑皮質(zhì)素3/4受體

4、拮抗劑SHU9119以及電刺激伏隔核對下丘腦腹內(nèi)側(cè)核胃擴(kuò)張敏感神經(jīng)元電生理活動的影響。
　　3.采用核團(tuán)微量注射藥物、腦核團(tuán)電刺激、攝食量記錄、胃酸滴定測量、在體胃運(yùn)動和胃排空酚紅定量測定等方法，觀察下丘腦腹內(nèi)側(cè)核微量注射nesfatin-1以及電刺激伏隔核對清醒大鼠攝食量、胃酸分泌、胃運(yùn)動和胃排空的影響。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核內(nèi)存在 nesfatin-1免疫陽性神經(jīng)元；胃擴(kuò)張刺激腹內(nèi)側(cè)核nesfat

5、in-1免疫陽性神經(jīng)元中c-Fos表達(dá)增多，細(xì)胞活性增強(qiáng)。
　　2.下丘腦腹內(nèi)側(cè)核中注射熒光金可逆行至伏隔核，且存在熒光金與nesfatin-1免疫陽性神經(jīng)元共染，提示伏隔核與下丘腦腹內(nèi)側(cè)核間存在向下丘腦腹內(nèi)側(cè)核投射的神經(jīng)纖維，且部分投射纖維由nesfatin-1免疫陽性神經(jīng)元發(fā)出延伸至下丘腦腹內(nèi)側(cè)核。
　　3.腹內(nèi)側(cè)核共記錄到64個胃擴(kuò)張敏感神經(jīng)元，其中35個神經(jīng)元（54.7%）為胃擴(kuò)張興奮神經(jīng)元（GD-E），29個神經(jīng)元

6、（45.3%）為胃擴(kuò)張抑制神經(jīng)元（GD-I），提示下丘腦腹內(nèi)側(cè)核可接受來自胃部的傳入信息。
　　4.腹內(nèi)側(cè)核微量注射nesfatin-1，24.14%的GD-I神經(jīng)元興奮，放電頻率從2.45±0.37 Hz升高到3.82±0.56 Hz（P＜0.05）；22.86%的GD-E神經(jīng)元被抑制，放電頻率從2.77±0.39降低到1.67±0.37 Hz（P＜0.05）。Nesfatin-1對胃擴(kuò)張敏感神經(jīng)元的影響可被腹內(nèi)側(cè)核預(yù)先注射黑皮

7、質(zhì)素3/4受體拮抗劑SHU9119部分阻斷（P＜0.05）。
　　5.電刺激伏隔核，腹內(nèi)側(cè)核胃擴(kuò)張敏感神經(jīng)元中的59.26%GD-I神經(jīng)元興奮，放電頻率從2.33±0.57 Hz升高到3.45±0.34 Hz（P＜0.05）；此作用可被腹內(nèi)側(cè)核預(yù)先注射nesfatin-1抗體部分阻斷（P＜0.05）；電刺激伏隔核，53.06%的GD-E神經(jīng)元興奮，放電頻率從2.74±0.71 Hz增加到5.08±1.15 Hz（P＜0.05)；腹

8、內(nèi)側(cè)核中預(yù)先注射nesfatin-1抗體可進(jìn)一步增強(qiáng)GD-E神經(jīng)元興奮性，放電頻率升至6.81±1.13 Hz（P＜0.05）。腹內(nèi)側(cè)核單獨(dú)注射nesfatin-1抗體或生理鹽水GD神經(jīng)元放電活動無顯著改變（P＞0.05）。
　　6.腹內(nèi)側(cè)核注射低劑量 nesfatin-1，大鼠2h內(nèi)攝食量顯著減少，注射高劑量的nesfatin-1，攝食量的減少可持續(xù)約4-6 h；腹內(nèi)側(cè)核注射nesfatin-1，由皮下注射2-脫氧-D-葡萄糖引

9、起的胃酸分泌也受到顯著抑制（48.63±10.21%）；注射nesfatin-1后約4 min，大鼠胃運(yùn)動開始下降，15 min達(dá)最低點(diǎn)，下降（35.2±8.9%，P＜0.05）；腹內(nèi)側(cè)核注射nesfatin-1，大鼠胃排空顯著減弱，排空率降至50.15±15.6%（p＜0.05）；腹內(nèi)側(cè)核預(yù)先給予黑皮質(zhì)素3/4受體拮抗劑SHU9119，可部分阻斷腹內(nèi)側(cè)核注射nesfatin-1對攝食和胃功能的抑制效應(yīng)（P＜0.05）。
　　7.

10、20μA低電流刺激大鼠伏隔核，大鼠攝食無顯著改變（P＞0.05），但采用50μA高電流刺激伏隔核，2–6 h間大鼠的累積攝食量均低于假電刺激組（P＜0.05），且2-脫氧-D-葡萄糖誘導(dǎo)的胃酸分泌增多也受到顯著抑制（9.16±1.53降至5.52±0.88μEq/15min，P＜0.05）；50μA高電流刺激伏隔核，大鼠胃運(yùn)動MI%值降至假電刺激對照組的72.25±9.82%（P＜0.05）；胃排空率也減少為假電刺激對照組的68.36±

11、8.79%（P＜0.05）。下丘腦腹內(nèi)側(cè)核預(yù)先注射nesfatin-1抗體，可消弱電刺激伏隔核抑制大鼠攝食、胃酸分泌和胃動力效應(yīng)（P＜0.05）。下丘腦腹內(nèi)側(cè)核單獨(dú)注射nesfatin-1抗體或NS對大鼠攝食量、胃酸分泌量和胃動力無顯著影響（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.下丘腦腹內(nèi)側(cè)核有 nesfatin-1免疫陽性神經(jīng)元表達(dá)，且胃擴(kuò)張可改變部分nesfatin-1神經(jīng)元活性；
　　2.伏隔核內(nèi)nesfatin

12、-1免疫陽性神經(jīng)元可發(fā)出神經(jīng)纖維投射至下丘腦腹內(nèi)側(cè)核，形成伏隔核-下丘腦腹內(nèi)側(cè)核nesfatin-1神經(jīng)通路；
　　3.下丘腦腹內(nèi)側(cè)核可接受胃來源的信號，nesfatin-1可影響這些胃來源信號的傳入，并可通過改變傳出沖動參與食物攝取、胃酸分泌、胃運(yùn)動以及胃排空等功能的調(diào)控；
　　4. Nesfatin-1在伏隔核-下丘腦腹內(nèi)側(cè)核通路可調(diào)控大鼠攝食、胃酸分泌、胃運(yùn)動以及胃排空，這提示，伏隔核和下丘腦腹內(nèi)側(cè)核間有nesfati