應(yīng)激對(duì)大鼠延髓和下丘腦胃機(jī)能調(diào)控中樞神經(jīng)通路影響的研究.pdf

1、束縛-浸水應(yīng)激(Restraint Water-Immersion Stress，RWIS；水溫21±1℃)是一種心理和軀體的復(fù)合應(yīng)激模型，刺激強(qiáng)度較大。該模型可在短時(shí)間內(nèi)導(dǎo)致大鼠情緒改變、體溫降低和胃腸機(jī)能紊亂，包括胃運(yùn)動(dòng)機(jī)能亢進(jìn)、胃酸分泌增多、急性胃粘膜損傷等。
　　傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為應(yīng)激(stress)主要啟動(dòng)“下丘腦-腺垂體-腎上腺皮質(zhì)”軸，通過(guò)引發(fā)一系列生物學(xué)反應(yīng)進(jìn)而改變器官系統(tǒng)的功能狀態(tài)，從而使機(jī)體內(nèi)環(huán)境保持穩(wěn)態(tài)以應(yīng)對(duì)應(yīng)激性

2、刺激。而眾多研究表明 RWIS主要誘導(dǎo)副交感神經(jīng)系統(tǒng)的活動(dòng)加強(qiáng)。
　　延髓是胃機(jī)能初級(jí)調(diào)控中樞，其內(nèi)的迷走神經(jīng)背核和疑核發(fā)出迷走神經(jīng)中的副交感纖維到胃，支配胃的活動(dòng)。延髓的孤束核是內(nèi)臟感覺(jué)信息的接受核團(tuán)，來(lái)自胃腸的感覺(jué)信息經(jīng)孤束核中繼向更高級(jí)中樞傳導(dǎo)。由此可見(jiàn)，延髓是直接對(duì)胃機(jī)能狀態(tài)進(jìn)行調(diào)控的神經(jīng)中樞。下丘腦是調(diào)節(jié)內(nèi)臟活動(dòng)的較高級(jí)中樞。形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，RWIS在導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生應(yīng)激性胃粘膜損傷的同時(shí)，還引起大鼠延髓迷走神經(jīng)背核、孤束核

3、、最后區(qū)及下丘腦室旁核、視上核內(nèi) Fos表達(dá)加強(qiáng)?？梢?jiàn)延髓、下丘腦胃機(jī)能調(diào)控中樞內(nèi)神經(jīng)元活動(dòng)加強(qiáng)與應(yīng)激性胃粘膜損傷的產(chǎn)生具有密切關(guān)聯(lián)。
　　眾多研究表明，室旁核與迷走神經(jīng)背核、孤束核間均存在雙向的纖維聯(lián)系。室旁核和視上核都是位于下丘腦視前區(qū)的兩個(gè)非常重要的神經(jīng)核團(tuán)，其大細(xì)胞性分泌神經(jīng)元分泌的抗利尿激素和催產(chǎn)素分別經(jīng)室旁垂體束和視上垂體束運(yùn)輸至神經(jīng)垂體。研究表明室旁核和視上核是下丘腦在RWIS狀態(tài)下參與胃機(jī)能調(diào)控的兩個(gè)神經(jīng)核團(tuán)。既然

4、室旁核與延髓部位纖維聯(lián)系密切，那么視上核也應(yīng)該與延髓部位的核團(tuán)之間存在纖維聯(lián)系，有研究已經(jīng)證明它和孤束核之間是有直接纖維聯(lián)系，那么還有一個(gè)問(wèn)題需要解決:視上核與迷走神經(jīng)背核之間是否存在纖維聯(lián)系?
　　越來(lái)越多的研究表明應(yīng)激能改變軸漿運(yùn)輸和突觸的機(jī)能狀態(tài)，在一定情況下甚至還能使“沉默突觸”激活。那么RWIS這種強(qiáng)大的復(fù)合型應(yīng)激是否也會(huì)對(duì)神經(jīng)通路產(chǎn)生類(lèi)似的影響，從而促使應(yīng)激性胃粘膜損傷的產(chǎn)生?
　　另一個(gè)問(wèn)題是，如果膈肌下切斷迷

5、走神經(jīng)，消除來(lái)自外周(胃腸)的應(yīng)激反饋信息后，RWIS狀態(tài)下大鼠延髓和下丘腦對(duì)胃腸的調(diào)控會(huì)發(fā)生怎樣的變化?
　　針對(duì)以上提出的問(wèn)題，本文分兩部分。
　　第一部分應(yīng)用辣根過(guò)氧化物酶逆行追蹤方法探討兩個(gè)問(wèn)題:(1)視上核與迷走神經(jīng)背核間是否存在纖維聯(lián)系。(2)RWIS是否對(duì)延髓、下丘腦兩個(gè)胃機(jī)能調(diào)控中樞間的神經(jīng)通路產(chǎn)生影響。將雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為2組:束縛-浸水應(yīng)激組，對(duì)照組。應(yīng)激組動(dòng)物，向迷走神經(jīng)背核內(nèi)微量注射HRP，

6、動(dòng)物清醒后給予 RWIS3h，注射HRP48～60h后，過(guò)量戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉動(dòng)物，快速心臟灌流固定腦組織、脫水處理，然后進(jìn)行冰凍切片。漂浮切片進(jìn)行HRP組化顯色。對(duì)照組動(dòng)物除不進(jìn)行RWIS外，其余操作均同應(yīng)激組。
　　結(jié)果顯示，無(wú)論是對(duì)照組還是應(yīng)激組，在下丘腦室旁核、視上核均發(fā)現(xiàn) HRP標(biāo)記的神經(jīng)元胞體；應(yīng)激組室旁核內(nèi) HRP標(biāo)記的神經(jīng)元胞體數(shù)目較對(duì)照組顯著增多(P＜0.01)，而視上核內(nèi)無(wú)顯著性變化；同側(cè)室旁核 HRP標(biāo)記

7、的神經(jīng)元胞體數(shù)較對(duì)側(cè)室旁核多(P＜0.01)。這些結(jié)果提示:視上核有向迷走神經(jīng)背核投射的神經(jīng)元，說(shuō)明視上核和室旁核在胃機(jī)能調(diào)控中都起重要作用；RWIS使室旁核到迷走神經(jīng)背核的神經(jīng)纖維末梢(指“沉默末梢”被激活成“活性末梢”的數(shù)目)增多了，說(shuō)明室旁核與迷走神經(jīng)背核之間神經(jīng)通路在RWIS過(guò)程中對(duì)胃腸調(diào)控起重要的作用。
　　第二部分應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法探討切斷膈肌下迷走神經(jīng)阻斷來(lái)自胃腸的應(yīng)激反饋信息和傳出指令后，在束縛-浸水應(yīng)激狀態(tài)下，

8、大鼠延髓、下丘腦神經(jīng)元 Fos的表達(dá)情況，從另一方面研究應(yīng)激反饋信息對(duì)中樞調(diào)控的影響。本研究將雄性Wistar大鼠隨機(jī)分2組:手術(shù)組、對(duì)照組。手術(shù)組切斷雙側(cè)膈肌下迷走神經(jīng)，對(duì)照組同樣暴露神經(jīng)但不切斷。術(shù)后6 d進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將大鼠束縛-浸水應(yīng)激3 h后處死，測(cè)腹腔溫度；取胃，觀察胃粘膜損傷程度；取腦，應(yīng)用免疫組化染色方法觀察兩組動(dòng)物延髓、下丘腦神經(jīng)元的Fos表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，手術(shù)組動(dòng)物延髓迷走神經(jīng)背核、孤束核、下丘腦室旁核 Fos表達(dá)較對(duì)照組