下丘腦弓狀核-外側(cè)隔核ghrelin通路構(gòu)成及對(duì)胃運(yùn)動(dòng)調(diào)控研究.pdf

1、目的:
　　 Ghrelin是生長(zhǎng)激素促分泌素受體(GHS-R)的內(nèi)源性配體，具有多種生物學(xué)活性，如促進(jìn)生長(zhǎng)激素(GH)分泌、攝食及胃腸運(yùn)動(dòng)等。Ghrelin及其受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)特別是與攝食和食欲調(diào)控相關(guān)中樞廣泛分布。本實(shí)驗(yàn)將定位于下丘腦弓狀核(ARC)和外側(cè)隔核:①觀察外側(cè)隔核ghrelin及其受體GHSR-1a的表達(dá);研究下丘腦ARC→外側(cè)隔核ghrelin神經(jīng)通路的構(gòu)成;②探討ghrelin對(duì)外側(cè)隔核胃擴(kuò)張(GD)敏感神

2、經(jīng)元放電活動(dòng)的影響，以及下丘腦ARC對(duì)其調(diào)控作用，闡明下丘腦ARC-外側(cè)隔核ghrelin功能通路的構(gòu)成;（③探討下丘腦ARC-外側(cè)隔核ghrelin通路對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的調(diào)控作用，補(bǔ)充和完善胃運(yùn)動(dòng)調(diào)控的中樞機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、Western blot和熒光免疫組化研究，觀察ghrelin及其受體GHSR-1a在外側(cè)隔核的定位和定性表達(dá);采用熒光金(FG)逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化技術(shù)，觀察

3、下丘腦ARC→外側(cè)隔核ghrelin神經(jīng)通路的構(gòu)成。
　　 2.采用核團(tuán)微量注射、核團(tuán)電刺激、細(xì)胞外放電記錄方法，觀察ghrelin及其受體拮抗劑[D-Lys-3]-GHRP-6，以及電刺激ARC對(duì)外側(cè)隔核GD敏感神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響。
　　 3.采用核團(tuán)電刺激、核團(tuán)電損毀、在體胃運(yùn)動(dòng)等方法，觀察外側(cè)隔核微量注射ghrelin、電刺激ARC以及電損毀外側(cè)隔核對(duì)清醒大鼠胃運(yùn)動(dòng)的影響;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-tim

4、e PCR)和Western blot方法，觀察電刺激ARC對(duì)外側(cè)隔核ghrelin及其受體GHSR-1a mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠外側(cè)隔核有g(shù)hrelin及其受體GHSR-la的表達(dá);ghrelin免疫陽(yáng)性神經(jīng)元主要分布于外側(cè)隔核的背側(cè)區(qū)和中間區(qū)，而GHSR-1a免疫陽(yáng)性神經(jīng)元分布于外側(cè)隔核的背側(cè)區(qū)、中間區(qū)和腹側(cè)區(qū)。
　　 2.下丘腦ARC發(fā)出纖維投射至外側(cè)隔核，并呈同側(cè)投射

5、優(yōu)勢(shì);下丘腦ARC有g(shù)hrelin免疫陽(yáng)性神經(jīng)元向外側(cè)隔核的投射。
　　 3.外側(cè)隔核共記錄到123個(gè)GD敏感神經(jīng)元，其中59個(gè)(47.97％)為GD興奮神經(jīng)元(GD-E)，64個(gè)(52.03％)為GD抑制神經(jīng)元(GD-I)，提示外側(cè)隔核可接受來(lái)自胃腸道的傳入信息。
　　 4.外側(cè)隔核給予ghrelin后，71.19％的GD-E神經(jīng)元興奮，放電頻率從5.82±1.22 Hz升高到8.20±1.68 Hz(P＜0.01);

6、75.56％的GD-I神經(jīng)元興奮，放電頻率從5.30±1.61Hz升高到7.27±1.95 Hz(P＜0.01)。這一興奮作用可被外側(cè)隔核預(yù)先給予ghrelin受體拮抗劑[D-Lys-3]-GHRP-6完全阻斷(P＜0.01)。電刺激ARC，外側(cè)隔核對(duì)ghrelin有反應(yīng)的神經(jīng)元中，66.67％的GD-E神經(jīng)元興奮，放電頻率從4.88±1.32 Hz升高到7.69±2.48 Hz(P＜0.01);65.31％的GD-I神經(jīng)元被激活，放電

7、頻率從5.04±1.74 Hz增加到7.08±1.15 Hz(P＜0.01)。電刺激ARC的這一興奮作用可被外側(cè)隔核預(yù)先給予[D-Lys-3]-GHRP-6部分阻斷(P＜0.05)。外側(cè)隔核單獨(dú)給予[D-Lys-3]-GHRP-6或NS則無(wú)顯著影響(P＞0.05)。
　　 5.外側(cè)隔核微量注射ghrelin，大約5min后胃收縮幅度和頻率顯著增加，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系(P＜0.05-0.01);外側(cè)隔核給予ghrelin及其受體拮

8、抗劑[D-Lys-3]-GHRP-6混合液，ghrelin促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)的興奮作用消失(P＜0.05-0.01)。電刺激ARC，3-23 min期間胃收縮幅度和頻率顯著增加(P＜0.05-0.01);外側(cè)隔核預(yù)先給予ghrelin受體拮抗劑[D-Lys-3]-GHRP-6，電刺激ARC的這一興奮作用顯著減弱(P＜0.05-0.01)。外側(cè)隔核單獨(dú)給予[D-Lys-3]-GHRP-6或NS對(duì)胃運(yùn)動(dòng)則無(wú)顯著影響(P＞0.05)。
　　

9、6.電損毀外側(cè)隔核，胃收縮強(qiáng)度為26.85±9.76 g，與假損毀組(40.66±10.03 g)比較顯著下降(P＜0.05);電損毀外側(cè)隔核，再電刺激ARC，胃收縮幅度和頻率與假損毀+假電刺激組比較顯著升高(P＜0.05-0.01)，但與假損毀+電刺激組比較則有所下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 7.電刺激ARC，外側(cè)隔核ghrelin表達(dá)顯著增加(P＜0.05);但ghrelin mRNA、GHSR-1amRNA

10、及其蛋白表達(dá)均無(wú)顯著改變(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.外側(cè)隔核有g(shù)hrelin及其受體GHSR-1a的表達(dá)。
　　 2.下丘腦ARC ghrelin免疫陽(yáng)性神經(jīng)元可發(fā)出纖維投向外側(cè)隔核。
　　 3.外側(cè)隔核可接受胃?jìng)魅胄畔⒉⑴c胃運(yùn)動(dòng)的調(diào)控。
　　 4.Ghrelin在外側(cè)隔核可興奮GD-E和GD-I神經(jīng)元，并可促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)，下丘腦ARC參與該過(guò)程調(diào)控。
　　 5.Ghreli