PBEF激活P38MAPK-ERK信號(hào)通路增加缺氧-復(fù)氧損傷的內(nèi)皮細(xì)胞通透性相關(guān)研究.pdf

1、目的:
　　根據(jù)前期研究缺氧-復(fù)氧處理正常培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞一定時(shí)間，模擬臨床心臟手術(shù)過(guò)程中肺缺血再灌注時(shí)肺內(nèi)皮細(xì)胞的病理生理變化,RNAi轉(zhuǎn)染抑制前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子(PBEF)基因表達(dá)，檢測(cè)PBEF表達(dá)變化,研究PBEF表達(dá)水平對(duì)TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥因子和細(xì)胞收縮力、細(xì)胞-細(xì)胞間粘附、細(xì)胞-基質(zhì)間粘附的作用,研究PBEF在缺氧-復(fù)氧損傷的內(nèi)皮細(xì)胞通透性變化過(guò)程中與P38MAPK/ERK信號(hào)途徑的激活是否密切

2、相關(guān)。
　　方法：
　　1、根據(jù)前期研究建立HUVECs缺氧(20h)／復(fù)氧(9h)模型、合成PBEFsiRNA序列。
　　2、根據(jù)對(duì)培養(yǎng)的HUVECs隨機(jī)采用缺氧-復(fù)氧和RNAi干預(yù)措施，分為缺氧復(fù)氧PBEFsiRNA轉(zhuǎn)染組、缺氧復(fù)氧siRNA陰性控制組、缺氧復(fù)氧組、正常培養(yǎng)組。
　　3、Western blot檢測(cè)各組中內(nèi)皮細(xì)胞PBEF表達(dá)水平、ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)含量。

3、>　　4、Western blot檢測(cè)各組中內(nèi)皮細(xì)胞肌球蛋白輕鏈(MLC)及其磷酸化表達(dá)水平。
　　5、Western blot檢測(cè)各組HUVECs中鈣粘蛋白(VE-cadherin)、粘著斑激酶（focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）及其磷酸化表達(dá)水平和樁蛋白（paxillin）、連環(huán)蛋白(β-Catenin)表達(dá)水平。
　　6、Western blot檢測(cè)各組HUVECs中P38、ERK及其磷酸化表達(dá)水平。

4、
　　結(jié)果：
　　1、PBEF在缺氧-復(fù)氧誘導(dǎo)損傷的HUVECs中表達(dá)明顯增加，PBEF可促進(jìn)TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥介質(zhì)的表達(dá)釋放（P＜0.01）。
　　2、PBEF可通過(guò)促進(jìn)MLC、VE-cadherin、FAK磷酸化和β-Catenin、paxillin蛋白的表達(dá)，改變細(xì)胞收縮力，細(xì)胞-細(xì)胞附著力、細(xì)胞-基質(zhì)附著力，改變內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)（P＜0.01）。
　　3、PBEF可通過(guò) P38MAPK和 E