RTEF-1抗血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加的機(jī)制研究.pdf

1、目的：以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECs作為研究對(duì)象，探討RTEF-1對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性異常增加的影響及其機(jī)制。
　　方法：用PXJ40/RTEF-1質(zhì)粒及空白對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HUVECs細(xì)胞建立RTEF-1過表達(dá)及對(duì)照細(xì)胞模型；用RTEF-1 siRNA1、RTEF-1 siRNA2及negative control siRNA建立RTEF-1抑制及對(duì)照的細(xì)胞模型；用Q-PCR及western blot檢測(cè)RTEF-1過表達(dá)及抑制效率

2、后，將細(xì)胞分為5組：control組：轉(zhuǎn)染PXJ40空白對(duì)照質(zhì)粒的HUVECs細(xì)胞；RTEF-1 o/e組：轉(zhuǎn)染PXJ40質(zhì)粒過表達(dá)RTEF-1的HUVECs細(xì)胞；NC siRNA組：用negative control siRNA轉(zhuǎn)染的HUVECs細(xì)胞；RTEF-1 siRNA1組：用RTEF-1 siRNA1轉(zhuǎn)染的HUVECs細(xì)胞；RTEF-1 siRNA2組：用RTEF-1 siRNA2轉(zhuǎn)染的HUVECs細(xì)胞。采用transwell

3、雙室式單層內(nèi)皮細(xì)胞模型系統(tǒng)檢測(cè)RTEF-1過表達(dá)及抑制對(duì)LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加的影響。用Q-PCR及western blot檢測(cè)RTEF-1過表達(dá)及抑制對(duì)Edg-1、SPHK1,2、用Q-PCR檢測(cè)緊密連接相關(guān)基因claudin3、claudin4、ZO-1、ZO-2及occludin，粘附連接相關(guān)基因VE-cadherin以及縫隙連接相關(guān)基因CX43、CX37及CX40表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：LPS誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加

4、，過表達(dá)RTEF-1可抑制這種增加的內(nèi)皮細(xì)胞通透性（P<0.05）；RTEF-1過表達(dá)上調(diào)Edg-1表達(dá)，抑制RTEF-1基因表達(dá)可下調(diào)Edg-1、SPHK1、SPHK2表達(dá)，上調(diào)claudin3、claudin4及CX43 mRNA表達(dá)，對(duì)ZO-1、ZO-2、occludin、VE-cadherin、 CX37以及CX40表達(dá)無明顯影響。
　　結(jié)論：RTEF-1抑制LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加，其機(jī)制與RTEF-1調(diào)控Edg-