前B細胞克隆增強因子(PBEF)在缺氧-復氧內(nèi)皮細胞通透性增加的相關性研究.pdf

1、目的:建立缺氧/復氧模型，檢測缺氧/復氧后內(nèi)皮細胞中PBEF(pre-B-cellcolony-enhancing factor，前B細胞克隆增強因子)的蛋白表達變化，通過RNA干擾沉默PBEF基因探討PBEF與VEGF(Vascular endothelial growth factor，血管內(nèi)皮細胞生長因子)和（Phosphorylation-myosin light chain kinase，磷酸化的肌球蛋白輕鏈）的關系，研究PB

2、EF在缺氧/復氧后內(nèi)皮細胞通透性增加的機制。
　　方法:1、根據(jù)文獻合成PBEFsiRNA, HUVEC根據(jù)處理的不同分為空脂質(zhì)體對照組、陰性對照組和PBEFsiRNA組，通過RT-PCR和western blot分別在基因水平和蛋白水平檢測PBEF的表達情況。
　　2、建立內(nèi)皮細胞缺氧/復氧模型，根據(jù)對HUVEC處理的不同將實驗分為正常對照組、缺氧（20小時）/復氧（3小時）組、缺氧（20小時）/復氧（6小時）組、缺氧（2

3、0小時）/復氧（9小時）組、缺氧（20小時）/復氧（12小時）;Westernblot檢測PBEF的蛋白表達情況。
　　3、根據(jù)對HUVEC處理的不同將實驗分為:Ⅰ組（缺氧/復氧+空脂質(zhì)體對照組），Ⅱ組（缺氧/復氧+陰性對照組），Ⅲ組（缺氧/復氧+PBEFsiRNA組）、Ⅳ組（空脂質(zhì)體對照組），western blot檢測VEGF和p-MLC的表達情況。
　　結(jié)果:1、PBEFsiRNA干擾PBEF的mRNA和蛋白表達水平與

4、脂質(zhì)體對照、陰性對照相比明顯下調(diào)(P＜0.05);陰性對照組和脂質(zhì)體對照組之間差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2、與正常對照組相比缺氧/復氧組PBEF蛋白表達明顯增加，復氧3h開始升高，9h達峰值，持續(xù)到12h后開始下降。(P＜0.05)
　　3、對HUVEC進行缺氧/復氧和RNA干擾后，Ⅰ組和Ⅱ組與Ⅳ組相比VEGF、p-MLC表達明顯升高(P＜0.05);Ⅲ組與Ⅰ組和Ⅱ組相比VEGF、p-MLC表達明顯下降(P＜0