Ang-Tie2通路在內皮細胞通透性增高中的作用研究.pdf

1、目的：長期使用非生理性腹膜透析（腹透）液引起腹膜轉運增高，導致腹膜超濾減少，是患者退出腹透的主要原因之一，然而其具體機制目前尚不清楚。血管生成素（Angiopoietin，Ang）及其受體 Tie2系統(tǒng)是參與調控血管通透性的重要因子，本研究從內皮細胞通透性的角度，采用體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞，觀察高濃度葡萄糖和葡萄糖降解產物甲基乙二醛對內皮細胞通透性和連接蛋白表達的影響，研究高濃度葡萄糖和甲基乙二醛對內皮細胞Ang2/Tie2信號表達的

2、影響，并進一步采用COMP-Ang1——人工合成的Ang1擬似物——與 Ang2競爭性結合Tie2受體，研究其對內皮細胞連接蛋白的表達和通透性的影響，以探討Ang2/Tie2信號在腹膜血管通透性增高中的作用。
　　方法：本研究采用體外培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞株 EA.hy926，分為以下四組：對照組，2.5％葡萄糖組，2.5%甘露醇組及200μM甲基乙二醛組，檢測內皮細胞對 FITC-BSA的通透性，采用Western Blot法檢

3、測內皮細胞對連接蛋白 VE-cadherin、Occludin及Claudin-5的表達；采用Real-time PCR法檢測內皮細胞Ang2和Tie2的表達，采用Western Blot檢測內皮細胞 Ang2和Tie2的表達；采用COMP-Ang1競爭性和Ang2結合Tie2受體，檢測其對內皮細胞通透性和連接蛋白表達的影響。
　　結果：
　　1.2.5%葡萄糖、2.5%甘露醇及200μM甲基乙二醛刺激12h后，與對照組相比

4、，2.5%葡萄糖（1.566±0.156 vs.1，P=0.024），2.5%甘露醇（1.438±0.090 vs.1，P=0.014）及200μM甲基乙二醛（1.482±0.135 vs.1，P=0.003）可以明顯增加內皮細胞對FITC-BSA的通透性。2.5%葡萄糖組（0.097±0.015 vs.0.349±0.052，P=0.001），2.5%甘露醇組（0.125±0.028 vs.0.349±0.052，P=0.003）及甲

5、基乙二醛組（0.142±0.024 vs.0.349±0.052，P=0.003）內皮細胞連結蛋白VE-cadherin的蛋白表達較對照組明顯降低；2.5%葡萄糖組（0.768±0.227 vs.1.274±0.100，P=0.024），2.5%甘露醇組（0.789±0.110 vs.1.274±0.100，P=0.005）及甲基乙二醛組（0.826±0.110 vs.1.274±0.100，P=0.006）的內皮細胞緊密連接蛋白Occ

6、ludin的蛋白表達較對照組明顯降低；2.5%葡萄糖組（0.171±0.028 vs.0.313±0.047，P=0.011），2.5%甘露醇組（0.195±0.034 vs.0.313±0.047，P=0.025）的內皮細胞緊密連接蛋白Claudin-5的蛋白表達較對照組明顯降低。
　　2.2.5%葡萄糖、2.5%甘露醇及200μM甲基乙二醛刺激12h后，2.5%葡萄糖組（1.739±0.348 vs.1，P=0.021）及甲基

7、乙二醛組（1.389±0.239 vs.1，P=0.048）的內皮細胞 Ang2 mRNA表達較對照組明顯增加。甲基乙二醛組的內皮細胞 Tie2 mRNA表達較對照組明顯增加（1.231±0.059 vs.1，P=0.048）。2.5%葡萄糖組（0.995±0.113 vs.0.663±0.041，P=0.009）、2.5%甘露醇組（0.900±0.129 vs.0.663±0.041，P=0.038）及甲基乙二醛組（0.886±0.0

8、84 vs.0.663±0.041，P=0.015）的內皮細胞 Ang2蛋白表達較對照組明顯增加;甲基乙二醛組的內皮細胞 Tie2蛋白表達較對照組明顯增加（0.737±0.090 vs.0.54±0.114，P=0.023）。
　　3.與2.5%葡萄糖組相比，2.5%葡萄糖+COMP-Ang干預組的內皮細胞對FITC-BSA的通透性明顯降低（1.235±0.119 vs.1.566±0.156，P=0.027），且對VE-cadh

9、erin（0.225±0.044 vs.0.097±0.015，P=0.032）、Claudin-5（0.605±0.038 vs.0.467±0.044，P=0.008）和Occludin（1.133±0.069 vs.0.768±0.227，P=0.024）的蛋白表達明顯增加；與2.5%甘露醇組相比，2.5%甘露醇+COMP-Ang干預組的內皮細胞對FITC-BSA的通透性明顯降低（1.213±0.095 vs.1.438±0.09

10、0，P=0.018），且對VE-cadherin（0.313±0.054 vs.0.125±0.028，P=0.006）、Claudin-5（0.646±0.066 vs.0.423±0.064，P=0.016）和Occludin（1.055±0.084 vs.0.809±0.100，P=0.031）的蛋白表達明顯增加；與200μM甲基乙二醇組相比，200μM甲基乙二醇+COMP-Ang干預組的內皮細胞對FITC-BSA的通透性明顯降低

11、（1.216±0.079 vs.1.482±0.135，P=0.009），且對VE-cadherin（0.237±0.032 vs.0.142±0.024，P=0.021）、Claudin-5（0.751±0.051 vs.0.561±0.100，P=0.046）和Occludin（1.056±0.078 vs.0.826±0.110，P=0.042）的蛋白表達明顯增加。
　　結論：高濃度葡萄糖和甲基乙二醇可能通過Ang2/Tie