發(fā)酵黃芪多糖的制備及其對小鼠樹突狀細(xì)胞成熟相關(guān)信號通路的影響.pdf

1、益生菌FGM為非解乳鏈球菌，是從雞的盲腸中分離的一株健康菌株。前期研究證明，黃芪經(jīng)益生菌FGM發(fā)酵后，多糖的得率有顯著提升，發(fā)酵提取的多糖對SD大鼠的肝纖維化有預(yù)防和治療作用，具有增強(qiáng)肉仔雞的免疫力、抗病力和免疫器官指數(shù)，也能促進(jìn)肉仔雞的健康狀況和生產(chǎn)性能。為了闡述發(fā)酵黃芪多糖（fermented Astragalus polysaccharides，F(xiàn)APS）的免疫調(diào)節(jié)機(jī)理，本論文采用溫浸法提取經(jīng)益生菌FGM發(fā)酵后的黃芪多糖，并對提取

2、的發(fā)酵黃芪多糖進(jìn)行了純化，應(yīng)用ELISA、RT-PCR和western blot等技術(shù)分析了發(fā)酵黃芪多糖對小鼠樹突狀細(xì)胞成熟過程的影響，取得了如下研究結(jié)果:
　　(1)采用Box-Benhnken響應(yīng)面法，優(yōu)化了黃芪經(jīng)發(fā)酵后的多糖提取工藝。提取時(shí)間65 min、提取溫度80℃、料液比1∶9時(shí)得到的FAPS含量最高，為6.72 mg/mL;提取時(shí)間、提取溫度和料液比對發(fā)酵黃芪多糖的含量影響顯著，并且每兩個(gè)因素間存在一定的交互作用。<

3、br>　　(2)采用水提醇沉法分別提取了發(fā)酵黃芪多糖(FAPS)和黃芪多糖(APS);采用苯酚硫酸法檢測了兩種多糖的得率和純度;采用鱟試劑(LAL)法對提取多糖的內(nèi)毒素的含量進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明:FAPS和APS的內(nèi)毒素含量均小于0.1EU/mL。發(fā)酵黃芪多糖的得率高于黃芪多糖的得率，分別為3.31％和1.91％。FAPS和APS的純度分別為91.3％和88.5％。
　　(3)采用ELISA、RT-PCR和顯微觀察技術(shù)分析結(jié)果表明

4、，不同濃度的FAPS和APS作用于小鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞(DCs)后，細(xì)胞的體積變大，其表面突起和陽性對照組(LPS)相似，突起變長且比較明顯，長短不一;ELISA結(jié)果表明，DC分泌IL-12、TNF-α、IL-1β、IL-6的量有顯著增加，這些細(xì)胞因子的mRNA的表達(dá)量也顯著增加，F(xiàn)APS組的效果明顯高于APS組;FAPS作用于DCs后，還能促進(jìn)T細(xì)胞增值。
　　(4)采用RT-PCR和western blot技術(shù)分析了FAPS誘

5、導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的相關(guān)信號通路。結(jié)果表明:FAPS通過TLR2或TLR4信號通路誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟;FAPS能極顯著增加磷酸化蛋白JNK、P38和NF-κBp65的表達(dá)量，提示:在FAPS促進(jìn)小鼠骨髓源DCs的成熟過程中，可能激活了MAPK和NF-κB信號通路。
　　綜上所述，提取時(shí)間、提取溫度和料液比對發(fā)酵黃芪多糖的提取率有顯著影響，各因素間存在一定的交互作用;利用本研究優(yōu)化的FAPS提取工藝和純化方法，可獲得純度較高的發(fā)酵黃芪