6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的帕金森病大鼠模型黑質(zhì)區(qū)高回聲形成機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景及目的：帕金森?。≒D）是主要累及中老年人一種的嚴(yán)重神經(jīng)退行性疾病，其主要的病理改變是中腦黑質(zhì)區(qū)（SN）多巴胺（DA）能神經(jīng)元進(jìn)行性變性缺失。研究發(fā)現(xiàn)90％左右的PD患者SN區(qū)會出現(xiàn)特征性的黑質(zhì)區(qū)片狀高回聲信號（SNH）。本研究采用6-羥基多巴胺（6-OHDA）制備大鼠PD模型，待成模后行經(jīng)顱超聲（TCS）探查觀察該P(yáng)D大鼠模型是否會出現(xiàn)SNH，之后取腦組織SN區(qū)冰凍切片進(jìn)行特異性鐵染色及免疫熒光染色等方法，將病理染色結(jié)果與超聲圖像

2、對照觀察來研究PD模型大鼠SNH的形成機(jī)制，為明確PD疾病的發(fā)生發(fā)展提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.偏側(cè)SN區(qū)立體定位注射神經(jīng)毒劑6-OHDA來制備PD大鼠模型，待成模后行TCS探查觀察PD模型大鼠SN區(qū)回聲表現(xiàn)，之后取腦冰凍切片行免疫組化染色以及Western-Blot實(shí)驗(yàn)檢測PD模型大鼠是否出現(xiàn)PD特征性病理改變，即SN區(qū)DA能神經(jīng)元變性壞死，驗(yàn)證PD模型造模是否成功。
　　2.將PD模型大鼠SN區(qū)冰凍切片進(jìn)行

3、特異性鐵染色，免疫熒光染色觀察PD模型大鼠SN區(qū)腦組織的病理改變，與獲得的超聲圖像對照觀察來研究SNH的形成機(jī)制。將PD模型大鼠SN區(qū)腦組織鐵含量進(jìn)行測定來探討SNH的形成與鐵的關(guān)系。
　　3.用鐵鰲合劑去鐵酮（DFP）干預(yù)PD模型大鼠，DFP采取灌胃給藥。行TCS探查觀察DFP對PD模型大鼠SN區(qū)回聲信號的影響，之后進(jìn)行SN區(qū)鐵含量測定、特異性鐵染色以及免疫熒光染色觀察DFP對PD模型大鼠SN區(qū)病理改變的影響。
　　4.用

4、小膠質(zhì)細(xì)胞增生抑制劑Nitidine干預(yù)PD模型大鼠，Nitidine采取腹腔注射給藥。行TCS探查觀察Nitidine對PD模型大鼠SN區(qū)回聲信號的影響，之后進(jìn)行SN區(qū)鐵含量測定、特異性鐵染色觀察Nitidine對PD模型大鼠SN區(qū)鐵沉積的影響。
　　結(jié)果：
　　1. PD模型組大鼠SN區(qū)存活的DA能神經(jīng)元數(shù)量為24±4%，顯著低于假手術(shù)組的97±2%。PD模型組大鼠SN區(qū)的DA能神經(jīng)元標(biāo)志蛋白TH蛋白表達(dá)顯著減少，以上結(jié)

5、果說明6-OHDA誘導(dǎo)的PD大鼠模型建模成功。超聲探查PD模型組大鼠6-OHDA注射側(cè)SN區(qū)出現(xiàn)明顯的大面積片狀高回聲信號，面積為2.40±0.56 mm2，假手術(shù)組大鼠SN區(qū)未出現(xiàn)明顯異常回聲，僅有部分假手術(shù)組大鼠出現(xiàn)點(diǎn)條狀針道回聲。
　　2. PD模型組大鼠高回聲出現(xiàn)的SN區(qū)域大量鐵離子沉積，且鐵離子沉積部位均伴隨大量細(xì)胞核聚集，假手術(shù)組大鼠的相應(yīng)位置未出現(xiàn)鐵離子沉積，細(xì)胞核的排列與周圍組織相比也無明顯不同。PD模型組大鼠SN

6、區(qū)鐵含量為22.50±0.46 ng/mg，顯著高于假手術(shù)組同側(cè)SN區(qū)的鐵含量14.20±1.14 ng/mg。PD模型組大鼠SN區(qū)有大量小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞增生。
　　3. DFP干預(yù)組大鼠SN區(qū)出現(xiàn)小片狀或散點(diǎn)狀稍高回聲信號，面積為1.92±0.38 mm2，顯著小于PD模型組大鼠的2.92±0.92 mm2。DFP干預(yù)組大鼠SN區(qū)鐵離子沉積及鐵含量顯著低于PD模型組大鼠，且小膠質(zhì)細(xì)胞增生和星形膠質(zhì)細(xì)胞增生也顯著少于PD模

7、型組大鼠。DFP干預(yù)組大鼠SN區(qū)的存活的DA能神經(jīng)元為59±19%，顯著高于PD模型組大鼠的21±5%。
　　4. Nitidine干預(yù)組大鼠 SN區(qū)出現(xiàn)了小片狀稍高回聲信號，面積為1.73±0.20 mm2，顯著小于PD組大鼠的2.46±0.40 mm2。Nitidine干預(yù)組大鼠與PD模型組大鼠相比，鐵離子沉積顯著減少，SN區(qū)鐵含量也顯著降低。
　　結(jié)論：鐵沉積、小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的增生都參與了PD模型大鼠SNH的

8、形成。DFP可以顯著抑制SNH形成，染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)DFP抑制了SN區(qū)鐵離子沉積和兩種膠質(zhì)細(xì)胞的增生，進(jìn)一步證實(shí)了SNH的形成與鐵沉積和兩種膠質(zhì)細(xì)胞增生相關(guān)。DFP通過排除鐵和抑制兩種膠質(zhì)細(xì)胞增生保護(hù)DA能神經(jīng)元，因此DFP有神經(jīng)保護(hù)作用。鐵沉積越多，SNH越大，SN區(qū) DA能神經(jīng)元壞死也越嚴(yán)重，提示鐵沉積和SNH面積與PD疾病的嚴(yán)重性可能相關(guān)。用小膠質(zhì)細(xì)胞增生抑制劑Nitidine干預(yù)PD模型大鼠后，SNH的面積減小，SN區(qū)鐵含量降低