魚(yú)藤酮慢性帕金森病小鼠黑質(zhì)區(qū)α-synuclein蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、目的：⑴研究小鼠長(zhǎng)期暴露于殺蟲(chóng)劑魚(yú)藤酮后的行為學(xué)改變,及小鼠中腦黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元病理變化情況。⑵探討?hù)~(yú)藤酮慢性PD小鼠模型腦黑質(zhì)部α-syn蛋白表達(dá)改變,以及α-syn蛋白表達(dá)改變的時(shí)間規(guī)律。
　　 方法：①選取8周齡、健康、雄性C57BL,小鼠30只；共分五組,每組小鼠6只。分組給藥:第1組為對(duì)照組,每天給予背部皮下注射DMSO:生理鹽水為3.5L:1g的混合液,1ml/kg；第2組至第5組為實(shí)驗(yàn)組,各組分別按照0.5mg

2、/kg、1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0 mg/kg的劑量,予背部皮下注射魚(yú)藤酮溶液；每日一次,連續(xù)注射40天。末次注射后3天,利用爬桿實(shí)驗(yàn)、游泳實(shí)驗(yàn)和自由活動(dòng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè),觀察各組小鼠的活動(dòng)能力的變化情況；采用HE染色法、尼氏染色和DAB免疫組織化學(xué)法,觀察黑質(zhì)多巴胺細(xì)胞形態(tài)的改變、黑質(zhì)酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量及α-syn表達(dá)量的改變。②通過(guò)以上實(shí)驗(yàn),篩選出適

3、合劑量的魚(yú)藤酮模型作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M,并重新造模。在末次注射后3d.、30d、60d三個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn),利用爬桿實(shí)驗(yàn)、游泳實(shí)驗(yàn)和自由活動(dòng)實(shí)驗(yàn)觀察各組小鼠的行為學(xué)改變；采用HE染色法觀察黑質(zhì)多巴胺細(xì)胞形態(tài)改變；采用DAB免疫組織化學(xué)法檢測(cè)黑質(zhì)TH陽(yáng)性的多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量的改變,同時(shí)用免疫組化法、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)α-syn在黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：⑴2.0mg/kg、1.5mg/kg注射組小鼠死亡率高,分別為

4、100％和50％,放棄繼續(xù)進(jìn)行藥物注射；1.0mg/kg魚(yú)藤酮注射組小鼠有明顯豎毛、震顫、動(dòng)作徐緩、逃避反應(yīng)慢等帕金森病樣癥狀。爬桿實(shí)驗(yàn)、游泳實(shí)驗(yàn)和自由活動(dòng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組小鼠較對(duì)照組小鼠的活動(dòng)能力明顯減弱,并有顯著差異(p<0.05),而0.5mg/kg魚(yú)藤酮注射組和對(duì)照組沒(méi)有明顯差異。⑵形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果:1.0mg/kg組小鼠HE染色發(fā)現(xiàn)魚(yú)藤酮組小鼠黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元形態(tài)不規(guī)則；多巴胺能神經(jīng)元尼氏染色發(fā)現(xiàn)尼氏小體較對(duì)照組減少；實(shí)

5、驗(yàn)組小鼠中腦黑質(zhì)部TH免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少(P〈0.05)。故選取1.0mg/kg魚(yú)藤酮注射組作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。⑶在造模完成后動(dòng)態(tài)觀察小鼠行為學(xué)發(fā)現(xiàn),小鼠的行為學(xué)損害逐漸恢復(fù)；DAB免疫組織化學(xué)結(jié)果:①與對(duì)照組比較j3d實(shí)驗(yàn)組小鼠中腦黑質(zhì)部TH免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少31‰39％(p<0.05)；在2個(gè)月的觀察中發(fā)現(xiàn),TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元有所恢復(fù),但是仍然交對(duì)照組少。②魚(yú)藤酮實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,魚(yú)藤酮組小鼠中腦黑質(zhì)

6、部0L.syn陽(yáng)性染色增多,積分光密度值(IOD)增高,小鼠中腦黑質(zhì)ot-syn表達(dá)較對(duì)照組增加約30％,差別有顯著性(p<0.05)；并有a-syn陽(yáng)性聚集體的形成。③實(shí)驗(yàn)組小鼠成模后2個(gè)月,其中腦黑質(zhì)的僅.syn表達(dá)仍較對(duì)照組高。⑷RT-PCR結(jié)果顯示:魚(yú)藤酮實(shí)驗(yàn)組小鼠成模后3d時(shí)僅.syn的mRNA明顯增高；1月后恢復(fù)正常。
　　 結(jié)論：①魚(yú)藤酮1.0mg/kg處理40d的小鼠能產(chǎn)生PD樣的臨床和病理改變,可作為研究PD的