魚(yú)藤酮在帕金森病發(fā)病機(jī)制中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文利用魚(yú)藤酮建立了帕金森病(PD)的細(xì)胞模型，研究魚(yú)藤酮與細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激的相關(guān)性，同時(shí)應(yīng)用單胺氧化酶B抑制劑司來(lái)吉蘭(Deprenyl)，觀察其拮抗魚(yú)藤酮的毒性及保護(hù)細(xì)胞的作用。本課題分三部分。 第一部分：研究魚(yú)藤酮對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的神經(jīng)毒性作用。選用PC12細(xì)胞作為多巴胺能神經(jīng)元的細(xì)胞模型，通過(guò)四甲基偶氮唑鹽(MTT法)檢測(cè)法確定合適的魚(yú)藤酮濃度，作用于細(xì)胞后，經(jīng)用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡；用WesternBl

2、ot檢測(cè)p53、caspase-3、caspase-9等凋亡蛋白表達(dá)。　　第二部分：檢測(cè)魚(yú)藤酮處理后細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體功能及活性氧的水平，研究魚(yú)藤酮增加細(xì)胞氧化應(yīng)激的作用機(jī)制。選用PC12細(xì)胞，通過(guò)應(yīng)用合適的魚(yú)藤酮濃度作用于細(xì)胞，檢測(cè)線(xiàn)粒體內(nèi)膜及膜電位改變，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，并通過(guò)免疫熒光檢測(cè)α-synuclein聚集。　　第三部分：觀察司來(lái)吉蘭拮抗魚(yú)藤酮對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的毒性作用。選用PC12細(xì)胞，應(yīng)用合適濃度的魚(yú)藤酮

3、后，給予一定濃度的司來(lái)吉蘭，用MTT，流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡等方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激的改變?！　∩鲜鼋Y(jié)果表明：1、成功建立了魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的帕金森病細(xì)胞模型。魚(yú)藤酮可使多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)凋亡，其機(jī)制可能是通過(guò)p53、caspase-9和caspase-3通路。 2、魚(yú)藤酮可使細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位發(fā)生改變并破壞內(nèi)膜，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平增加，并且呈濃度依賴(lài)性，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)α-synuclein陽(yáng)性的類(lèi)包涵體，提示魚(yú)藤