溫肺化飲法對(duì)哮喘大鼠肺組織ADAM33、Inte-grin-β1、鈣結(jié)合蛋白S100A9表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：從分子生物學(xué)角度探討“溫肺化飲”法調(diào)控哮喘的機(jī)制。探討ADAM33、鈣結(jié)合蛋白S100A9及整聯(lián)蛋白的基因表達(dá)變化介導(dǎo)的氣道收縮及炎癥是哮喘的重要發(fā)病機(jī)制；探討“溫肺化飲”治法解除“寒邪”和“痰飲”的療效機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)ADAM33、鈣結(jié)合蛋白及整聯(lián)蛋白的表達(dá)從而改善氣道收縮及炎癥有關(guān)。
　　方法：大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按隨機(jī)數(shù)字表法分別分為6組：空白組（A)、模型組(B)、西藥組(C)、苓甘五味姜辛湯高劑量組(D)、苓甘五

2、味姜辛湯中劑量組(E)、苓甘五味姜辛湯低組(F)，每組12只。除A組外，其余各組采用綜合造模的方法，即致敏+霧化激發(fā)+冷水游泳。先在第1和第7天腹腔注射含有100mg OVA及100mg氫氧化鋁凝膠的抗原液1mL致敏；然后于15～29天，以含1％OVA的生理鹽水霧化吸入激發(fā)，1次/日，20min/次（持續(xù)到藥物治療結(jié)束）；在致敏和激發(fā)期間，每天將大鼠置于0±2℃水中游泳，每次30分鐘；同時(shí)每日給予飲用冷藏水，致使大鼠外感于寒，內(nèi)傷于陽(yáng)，

3、從而使大鼠出現(xiàn)肺脾陽(yáng)虛，宣降失常，寒飲內(nèi)停于肺的癥狀。A組則以生理鹽水致敏和霧化激發(fā)。造模第30天開(kāi)始藥物干預(yù)治療，連續(xù)30天，C組以1.0mg/kg/d的地塞米松腹腔注射，D、E、F組以苓甘五味姜辛湯8g·kg-1、4g·kg-1、2g·kg-1灌胃，A組和B組以等量生理鹽水灌胃。于末次激發(fā)24小時(shí)后，分別抽取腹主動(dòng)脈血和肺泡灌洗液，分離血清及肺泡灌洗液，-20℃保存?zhèn)溆?；取左肺組織，生理鹽水沖洗2-3次，存于-80℃冰箱冰凍保存，用

4、于RT-qPCR檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　?、倥c空白組比較，通過(guò)鏡下觀察后發(fā)現(xiàn)各組大鼠肺組織均有不同程度的氣道損傷和浸潤(rùn)的炎細(xì)胞。經(jīng)過(guò)苓甘五味姜辛湯及其加味干預(yù)后，各治療組的大鼠肺組織病理切片評(píng)分與模型組相比均降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；
　　②免疫組化結(jié)果顯示模型組大鼠的ADAM33陽(yáng)性染色為胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或褐色顆粒。該蛋白主要表達(dá)于氣道黏膜下的肺成纖維細(xì)胞，少量表達(dá)于氣道平滑肌細(xì)胞。經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)處理并計(jì)

5、算得到光密度值越大其陽(yáng)性表達(dá)水平越高，反之則表達(dá)水平越低。與空白組（0.22±0.016）相比，模型組（0.40±0.055）大鼠肺組織ADAM33的表達(dá)增加（P＜0.01），與模型組相比，其余各治療組大鼠肺組織中ADAM33的表達(dá)降低（P＜0.05）。
　?、叟c空白組相比，模型組(B)肺組織中 ADAM33蛋白的基因相對(duì)表達(dá)量明顯上升，具有顯著性意義( P＜0.05)。與模型組相比，西藥組、苓甘五味姜辛湯高、中、低劑量組肺組織中

6、ADAM33蛋白的基因相對(duì)表達(dá)量明顯下降，差異有顯著性意義( P＜0.05)。與苓甘五味姜辛湯高劑量組比較，苓甘五味姜辛湯中、低劑量組肺組織中ADAM33蛋白的基因相對(duì)表達(dá)量降低，差異有顯著性意義( P＜0.05)。
　　④與空白組相比，模型組(B)肺組織中Integrin-β1蛋白的基因相對(duì)表達(dá)量明顯上升，具有顯著性意義( P＜0.05)。與模型組相比，西藥組、苓甘五味姜辛湯高、中、低劑量組肺組織中Integrin-β1蛋白的基

7、因相對(duì)表達(dá)量明顯下降，差異有顯著性意義( P＜0.05)。與苓甘五味姜辛湯高劑量(D)比較，苓甘五味姜辛湯中、低劑量組肺組織中 Integrin-β1蛋白的基因相對(duì)表達(dá)量升高，差異有顯著性意義( P＜0.05)。
　?、菖c空白組相比，模型組肺組織中鈣結(jié)合蛋白S100A9的基因相對(duì)表達(dá)量明顯上升，具有顯著性意義( P＜0.05)。與模型組相比，苓甘五味姜辛湯高、中、低劑量組肺組織中鈣結(jié)合蛋白S100A9的基因相對(duì)表達(dá)量明顯下降，差異

8、有顯著性意義( P＜0.05)。與苓甘五味姜辛湯高劑量組比較，苓甘五味姜辛湯高中、低劑量組肺組織中Integrin-β1蛋白的基因相對(duì)表達(dá)量升高，差異有顯著性意義( P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　?、僖灾旅?霧化激發(fā)+冷水游泳綜合造模的方法能成功的造成寒飲伏肺型哮喘大鼠模型；
　?、诖笫蠓谓M織病理學(xué)檢測(cè)其結(jié)果表明：苓甘五味姜辛湯高、中、低劑量組均對(duì)病變肺組織有不同程度的修復(fù)作用；
　?、勰Ｐ徒M大鼠的ADAM33