Il-31在哮喘小鼠肺組織中的表達及對肺組織細胞分泌CK的影響.pdf

1、目的:
　　 本實驗通過研究IL-31和IL-31R在哮喘小鼠肺組織中的表達及趨化因子在hIL-31作用肺泡上皮細胞后的分泌情況，進一步探討IL-31在哮喘氣道炎癥中的作用。
　　 方法:
　　 1)采用卵白蛋白(OVA)致敏，激發(fā)的方法建立哮喘小鼠模型，將20只雌性BABL/C小鼠隨機分為A(對照組)和B(哮喘模型組)兩組，每組各10只。第一階段為致敏階段，分別在第1天和第14天腹腔注射0.2ml的100μg

2、OVA(Ovalbumin)和2.25mg氫氧化鋁凝膠(其濃度為13mg/ml)混懸液各1次；從第21天氣開始霧化吸入濃度為3％OVA，每次30min，連續(xù)7天，此階段為模型的激發(fā)階段；正常對照組小鼠，在致敏和激發(fā)兩個階段用PBS代替OVA進行。2)制作病理切片：完成致敏、激發(fā)后的模型小鼠，在結束激發(fā)后的24小時內(nèi)，無菌取肺組織，部分組織制作病理切片(HE染色)，觀察兩組小鼠氣道組織結構病理改變情況；部分組織提取總RNA，用于以后的實驗

3、。3)hIL-31作用A549細胞：用含15％胎牛血清的RPMI1640于37℃、5％CO2的環(huán)境下培養(yǎng)A549細胞。當細胞鋪滿瓶底的85％～95％時，用不同濃度(10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)hIL-31作用A549細胞和相同濃度(10ng/ml)hIL-31作用A549細胞不同時間(12小時、24小時、36小時)。4)用熒光定量PCR(FQ-PCR)方法檢測兩組小鼠肺組織IL-31及IL-31R的水平及趨化因子C

4、CL2在hIL-31作用A549細胞后的分泌情況。
　　 統(tǒng)計學處理以SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，兩組間的樣本均數(shù)用t檢驗。本研究設定檢驗水準a=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1)觀察哮喘組小鼠在霧化10分鐘左右可見鼻翼煽動增快，每分鐘可達350次左右，煩躁不安，嘴唇顏色加重，軀體呈弓背向上等癥狀。對照組小鼠未見明顯異常。2)病理切片顯示：哮喘小鼠

5、急性發(fā)作時，在支氣管及血管周圍有中性粒細胞和嗜酸性粒細胞浸潤；細胞結構破壞、骨架斷裂；胸腔壓力增大、肺泡破裂。3)熒光定量PCR的相對表達結果顯示：和正常對照組相比較，IL-31及IL-31R在哮喘小鼠急性發(fā)作時肺組織的表達增高，P<0.05，差異有意義。4)不同濃度hIL-31作用于A549細胞后，每組濃度與未處理組相比較，趨化因子CCL2的分泌均增高。P<0.05，差異有意義。5)同一濃度hIL-31作用A549細胞，CCL2在不同